稻瘟病菌中MoVPS17基因的功能分析

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稻瘟病菌(Magnaporthe oryzae)可侵染水稻等多种禾本科作物,造成作物严重减产。同时也是研究丝状真菌生长、发育以及致病性的重要模式系统。Retromer是一个五聚物蛋白复合体,主要介导跨膜蛋白从内涵体到高尔基体网络的逆向运输,进而影响生物体内物质的贮存、运输、分泌、免疫等多种生理过程。该复合体的各亚基的同源蛋白在不同物种间十分保守。根据其功能不同该复合体可分为两个亚复合物即CSC复合物和SNX dimers。前期的研究显示,稻瘟病菌的CSC亚复合物参与稻瘟病菌的菌丝生长、细胞壁完整性的维持、产孢以及侵染相关的结构发育、致病性致病侵染等多个生理过程。为研究稻瘟病菌中SNX dimers的功能和亚基间的相互作用,我们在稻瘟病菌基因组数据库进行同源序列比对,鉴定到稻瘟病菌中与酿酒酵母Vps17(SNX dimers组分之一)的同源基因MoVPS17(MGG01434)。以野生型菌株ΔKu80为背景,利用SOE的基因敲除方法,得到MoVPS17的敲除突变体,经southern进行验证后对突变体进行表型分析。MoVVP17基因的所有缺失转化子的生长速率都显著减慢;产孢能力急剧下降;用突变体的菌丝块分别对造伤和正常的大麦叶片进行离体接种,突变体较野生型相比,仅出现微弱的病斑,这些结果说明该基因对稻瘟病菌的营养生长、产孢和致病都非常重要。对ΔMovps17-Com株系中荧光蛋白的分析表明并在其菌丝、孢子萌发、侵染阶段都表达,而进一步运用内膜染料FM4-64进行染色,结果显示,部分MoVps17蛋白能与液泡膜共定位。酵母双杂交结果初步表明该蛋白仅能与其自身和MoVps5互作。综合以上结果我们初步认为:Vps17蛋白SNX dimers的成员之一,而且对稻瘟病菌的营养生长和致病性至关重要。
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