【摘 要】
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目的:研究通过应用大鼠ASCI动物模型,观察通督活血汤对大鼠ASCI后脊髓组织中PERK/ATF4/CHOP信号通路相关因子表达的影响以及对神经元凋亡水平的调控作用,探讨通督活血汤治疗脊髓损伤的作用机制,为该方的临床应用提供实验依据。方法:将56只SD大鼠按手术方法剖离椎板后,以随机法将其分为假手术组（n=8）、模型组（n=24）与实验组（n=24）。模型组和实验组两组再按照干预时间分为1d、3d
【基金项目】
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南京军区联勤部卫生部重点项目（No.14ZX26）； 福建省自然科学基金（No.2018J01891）；
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目的:研究通过应用大鼠ASCI动物模型,观察通督活血汤对大鼠ASCI后脊髓组织中PERK/ATF4/CHOP信号通路相关因子表达的影响以及对神经元凋亡水平的调控作用,探讨通督活血汤治疗脊髓损伤的作用机制,为该方的临床应用提供实验依据。方法:将56只SD大鼠按手术方法剖离椎板后,以随机法将其分为假手术组（n=8）、模型组（n=24）与实验组（n=24）。模型组和实验组两组再按照干预时间分为1d、3d、7d三个亚组,每个亚组8只。假手术组只切开椎板显露脊髓,其余两组采用改良Allen打击方法制备脊髓损伤模型。造模后连续灌胃,实验组灌服通督活血汤,其余两组灌服等量生理盐水,1次/天。灌胃干预后1d、3d、7d进行大鼠BBB行为学评分后处死取材。采用HE染色观察大鼠脊髓大鼠脊髓组织及脊髓神经元病理形态改变,TUNEL染色测定大鼠脊髓组织中细胞凋亡率,免疫组化染色法对大鼠脊髓组织中p-PERK、ATF4、CHOP阳性细胞的表达进行定位检测,Western Blot检测大鼠脊髓组织中p-PERK、ATF4、CHOP蛋白的表达量。结果:1、行为学评分:第一天三组大鼠行为学评分值验证造模成功。模型组和实验组大鼠损伤脊髓后感觉运动功能低于假手术组,差异显著。干预后3d、7d,实验组大鼠损伤脊髓后感觉运动功能优于模型组,差异具有统计学意义。2、形态学结果:HE染色提示假手术组脊髓结构完整,灰白质界限清楚呈蝴蝶状,神经细胞内可见虎斑样尼氏体;与模型组比较,实验组神经细胞水肿较轻,神经细胞形态较好,空泡样改变较少。模型组与实验组均可见脊髓组织内部分神经细胞细胞核肿大,核仁消失。3、TUNEL染色结果示:实验组与模型组相较于假手术组,大鼠脊髓组织中细胞凋亡率明显上升,统计学差异显著。模型组大鼠与实验组大鼠相比较,在灌胃1d、3d后脊髓组织中细胞凋亡率的差异没有统计学意义。灌胃7d后,实验组大鼠脊髓组织中细胞凋亡率高于模型组,两组之间的差异具有统计学意义。4、Western Blot结果:Western Blot结果显示假手术组大鼠脊髓组织中p-PERK、ATF4、CHOP表达较低;模型组和实验组大鼠脊髓组织中p-PERK、ATF4和CHOP在第3d达到峰值;与模型组比较,实验组大鼠脊髓组织中p-PERK、ATF4、CHOP的表达显著减少,且在灌胃后部分时间点观察到统计学差异显著。5、免疫组化染色结果显示:模型组大鼠干预后其脊髓组织中各时间点下的p-PERK、ATF4、CHOP蛋白表达吸光度值与假手术组相比差异具有统计学意义;实验组干预后各时间的p-PERK、CHOP蛋白表达吸光度值与假手术组相比差异具有统计学意义;实验组在干预后各时间段目的蛋白的吸关度值较模型组低,两组在干预后不同时间段p-PERK、CHOP蛋白的吸光度值差异具有统计学意义。结论:1、通督活血汤能促进大鼠急性脊髓损伤早期肢体功能的恢复;2、通督活血汤促进大鼠急性脊髓损伤后肢体功能修复的作用机制与该方能通过抑制PERK的磷酸化表达,继而下调ATF4水平,达到抑制CHOP的表达的作用,最终下调脊髓损伤后脊髓灰质神经元凋亡水平有关。
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