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大球盖菇（Stropharia rugosoannulata）是一种重要的食、药用真菌,其味美色优,营养丰富,具有增强人体免疫、降低血糖等保健及药用价值。大球盖菇属于中低温型食用菌,其菌丝生长温度适应范围为535℃,子实体形成及生长的温度范围为1020℃,在栽培实践中料温30℃以上易导致菌丝出现“烧菌”现象,当气温上升至20℃时子实体易开伞,品质变差,25℃时原基不分化。在我国华东地区露天栽培时,若89月份播种,1112月份出菇时产品质量好,耐储存,但播种后易遭遇到30℃以上高温,造成“烧菌”,导致栽培失败或减产。因此在生产上一般安排在1011月份播种,次年4月上旬地温稳定在12℃以上开始出菇,但由于春末夏初季节气温、地温均回升很快,在5月中旬以后子实体易开伞、不耐储存,商品品质迅速下降。为了解决生产上初秋早播菌丝不耐高温、晚秋播种来年春末夏初子实体易开伞的问题,本研究从菌丝耐高温驯化入手,在初筛获得耐高温驯化菌株的基础上,通过原生质体育种技术,定向选育出大球盖菇耐高温菌株,并对其进行室内外验证,最后筛选出优质高产的耐高温菌株,以期为华东地区提供可早秋栽培初冬季节采收的耐高温菌株,或者可延长春季出菇期的耐高温菌株。主要研究结果如下:1.试验菌株的收集及遗传多样性和亲缘关系分析通过SRAP分子标记技术,对国内外收集的23株大球盖菇菌株,进行亲缘关系和遗传多样性分析。结果表明,SRAP技术可以将23株大球盖菇菌株完全区分开,菌株TA和JN为同物异名菌株,去掉菌株JN,确定了22株供试菌株。2.耐高温递进式循环驯化试验采用递进式高温循环培养的方式,对22株供试菌株进行耐高温驯化,循环参数分别为（26℃,16h;30℃,8h）、（26℃,16h;34℃,8h）、（26℃,16h;38℃,8h）、（26℃,18h;42℃,6h）,每组循环16次,以26℃恒温培养的菌株作为对照,筛选耐高温菌株。获得4株可在38℃条件下培养8h小时生长良好,并可在42℃环境中存活6h的菌株,编号为S2、T2、Z2和D2。3.大球盖菇原生质体育种试验（1）选用耐高温递进式循环驯化初筛选出的D2作为供试菌株,进行了原生质体制备条件的单因素筛选试验。结果表明,在32℃,1.5%的溶壁酶的条件下酶解菌龄为4d的菌丝体3h,原生质体产量最高。（2）选用耐高温递进式循环驯化初筛选出的S2为出发菌株制备原生质体,在34℃条件下再生,定向选育出4株在38℃条件下菌丝生长速率高于出发菌株的耐高温菌株,编号为S18、S20、S24和S26。（3）以耐高温驯化株D2为出发菌株进行原生质体紫外诱变,34℃条件下定向选育出3株菌丝生长速率高于出发菌株的耐高温诱变菌株,编号为大11、大15和大16。（4）以耐高温驯化菌株S2和D2为亲本进行原生质体融合,34℃条件下定向选育出4株菌丝生长速率高于出发菌株的耐高温高产融合菌株,编号为R7、R9和R10和R15。4.大球盖菇耐高温菌株验证对筛选出的15株耐高温菌株进行拮抗试验、继代培养、SRAP亲缘关系分析,在此基础上进行了大球盖菇出菇试验,最终筛选出3株优良耐高温大球盖菇菌株,编号为S20、D2和R10。其中,菌株S20,在气温36℃、料温30℃以上条件下定植快、发菌好,出菇期比对照提前15 d,产量最高,且在25℃条件下原基正常分化;其次为菌株D2,在气温36℃、料温30℃条件下生长迅速,出菇期比对照菌株提前10 d以上,产量仅次于S20;菌株R10其原基可在30℃环境下正常分化,在25℃环境下子实体不易开伞,一级菇比例最高。