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目的:本研究归于国家自然科学基金(项目编号:81273703;81804045)。在大鼠受损心肌细胞模型基础上,探索复心汤拆方药对黄芪和葶苈子对线粒体动力学中分裂蛋白及融合蛋白影响,分析线粒体动力学的融合蛋白Mfn1、Mfn2、OPA1与分裂蛋白Fis1、Drp1的表达,评价并判定其干预大鼠心肌细胞的效果。同时随机分组临床试验,观察评定复心汤拆方黄芪葶苈子对心衰患者生活质量、中医证候、Lee氏心衰计分、NT-pro BNP水平、6分钟步行实验等结果进行评估,并与西药盐酸曲美他嗪组进行对照。明确复心汤拆方黄芪葶苈子治疗心力衰竭的作用机制及评定疗效,为临床及科研开启新的篇章,从而更好地加以提高心衰患者的生存质量。方法:1.动物实验:健康成年的雄性Wistar大鼠40只,随机分为空白对照组、复心汤拆方高、低剂量组、西药盐酸曲美他嗪组,分别给予生理盐水,高剂量复心汤拆方、低剂量复心汤拆方及西药盐酸曲美他嗪每天1次灌胃1周,末次灌胃后腹主动脉采血并分离血清,血清经灭活、滤菌。不同浓度含药血清细胞培养液干预大鼠原代心肌细胞后分别采用Western-blot法,RT-PCR法检测心肌细胞中蛋白Mfn1,Mfn2,OPA1及Drp1,Fis1表达情况或定量分析。2、临床疗效观察:将符合纳入标准的40例病人随机分为试验组、对照组,对照组予盐酸曲美他嗪+基础对症治疗,试验组予复心汤拆方+基础对症治疗,心衰基础治疗不变。治疗前及治疗8周后测定记录患者的NT-pro BNP水平和6分钟步行实验,并进行中医症候计分、Lee氏心衰计分及明尼苏达心衰生活质量评分。两组患者进行组内组间比较,实验数据进行统计分析,判定临床疗效。所有研究指标的结果建立数据库,以±S表示,使用SPSS19.0统计软件进行统计学处理。结果:1.动物实验:与盐酸阿霉素组(造模组)相比,大鼠空白血清组、复心汤拆方高剂量组、复心汤拆方低剂量组、盐酸曲美他嗪组蛋白Mfn1,Mfn2,OPA1及蛋白Drp1,Fis1的Western-blot法中表达及RT-PCR法中m-RNA表达均有统计学差异(P<0.05或<0.01)。且与对照组相比,盐酸阿霉素组各蛋白表达量均无统计学差异(P>0.05)。(1)Mfn1蛋白表达情况:Western-blot法中复心汤拆方低剂量组、盐酸曲美他嗪组Mfn1蛋白较盐酸阿霉素组表达量增高。与对照组相比,盐酸阿霉素组Mfn1蛋白表达量减少。RT-PCR法中复心汤拆方低剂量组、盐酸曲美他嗪组Mfn1蛋白m-RNA表达较盐酸阿霉素组表达量增高。与对照组相比,盐酸阿霉素组Mfn1蛋白mRNA表达量降低。(2)Mfn2表达情况:Western-blot法中复心汤拆方低剂量组Mfn2蛋白较盐酸阿霉素组表达量增高。与对照组相比,盐酸阿霉素组Mfn2蛋白表达量减少。RT-PCR法中复心汤拆方高剂量组、复心汤拆方低剂量组、盐酸曲美他嗪组Mfn2蛋白m-RNA表达较盐酸阿霉素组表达量增高。与对照组相比,盐酸阿霉素组Mfn2蛋白mRNA表达量增高。(3)OPA1蛋白表达情况:Western-blot法中复心汤拆方低剂量组OP A1蛋白较盐酸阿霉素组表达量增高。与对照组相比,盐酸阿霉素组OPA1蛋白表达量减少。RT-PCR法中复心汤拆方低剂量组OPA1蛋白m-RNA表达较盐酸阿霉素组表达量增高。与对照组相比,盐酸阿霉素组OPA1蛋白m-RNA表达量降低。(4)Drp1蛋白表达情况:Western-blot法中Drp1蛋白表达均低于盐酸阿霉素组。与对照组相比,盐酸阿霉素组Drp1蛋白表达量增高。RT-PCR法中Drp1蛋白m-RNA表达均低于盐酸阿霉素组。与对照组相比,盐酸阿霉素组Drp1蛋白m-RNA表达量增高。(5)Fis1蛋白表达情况:Western-blot法中空白血清组、复心汤拆方低剂量组Fis1蛋白较盐酸阿霉素组表达量增高。与对照组相比,盐酸阿霉素组Fis1蛋白表达量降低。RT-PCR法中空白血清组、复心汤拆方低剂量组、盐酸曲美他嗪组Fis1蛋白m-RNA较盐酸阿霉素组表达量增高。与对照组相比,盐酸阿霉素组Fis1蛋白m-RNA表达量降低。2.临床疗效观察:(1)中医症候改善率:两组患者治疗后中医症候计分均较治疗前降低,均有显著统计学意义(P<0.01);试验组总疗效95%,对照组总疗效65%,两组患者组间对比,无统计学差异(P>0.05)。(2)Lee氏心衰计分:两组患者治疗后,Lee氏心衰计分较治疗前明显降低,均有显著统计学意义(P<0.01);试验组有效率80%,对照组有效率75%,两组患者组间对比,无统计学差异(P>0.05)。(3)生活质量评分:两组患者治疗后,明尼苏达心力衰竭生活质量评分较治疗前明显降低,均有显著统计学意义(P<0.01);两组患者组间对比,无统计学差异(P>0.05)。(4)NTpro BNP水平:试验组、对照组患者疗程结束后NT-pro BNP较治疗前明显降低,均有显著统计学意义(P<0.01);(5)6分钟步行实验:两组患者治疗后步行距离均提高,均有显著统计学意义(P<0.01)。结论:1.低剂量复心汤拆方干预下的大鼠心肌细胞中蛋白Mfn1,Mfn2,OPA1及蛋白Drp1,Fis1的蛋白表达较高剂量复心汤拆方显著,且优于曲美他嗪效果;2.复心汤拆方可能通过调节大鼠心肌细胞内中线粒体融合蛋白Mfn1,Mfn2,OPA1及分裂蛋白Drp1,Fis1,促进受损心肌细胞线粒体融合,纠正线粒体融合分裂失衡;3.由相关理论及文献和本次实验结果,认为:复心汤拆方可能通过调节线粒体动力学相关蛋白中融合蛋白Mfn1,Mfn2,OPA1及分裂蛋白Drp1,Fis1的表达从而来达到治疗心衰的目的;4.复心汤拆方可改善心衰患者的中医症状及生活质量,提高患者运动耐量,且优于盐酸曲美他嗪疗效;对心衰治疗有效,降低患者NT-pro BNP,且与盐酸曲美他嗪疗效相当。5.复心汤拆方对心衰治疗安全可靠有效。