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癌症的治疗仍是当今尚未被攻克的一大生物医学难题。经过三十多年的研究发现,肿瘤抑制因子p53是否具有活性是影响肿瘤发生及癌症治疗效果的关键因素之一。目前,已发现很多通路能够调节p53的活性,其中,核糖体亚基蛋白(Ribosomal Proteins,RPs)-HDM2-p53是最近发现的影响p53活性的一条新的通路。一些核糖体亚基蛋白通过结合泛素E3连接酶HDM2的中间酸性结构域来抑制由HDM2介导的p53多泛素化降解。然而,其它的核糖体亚基蛋白是否也参与调节HDM2-p53这条环路,并且,在RPs-HDM2-p53这条通路的上游是否存在调节蛋白都是未知的。 人类蛋白hCINAP(human coilin interacting nuclear ATPase protein)在真核生物体内是一个非常保守的蛋白,然而,对该蛋白在人体内所行使的生理功能却知之甚少。本研究发现人类蛋白hCINAP可能与一些核糖体亚基蛋白、RNA剪接因子以及癌症相关蛋白相互作用。核糖体小亚基蛋白S14(Ribosomal ProteinS14,RPS14)是其中被识别的蛋白之一。通过体内和体外的实验,本研究证实了hCINAP与RPS14存在很强的相互作用。进一步的研究发现,过表达RPS14能够抑制HDM2并促进p53的稳定性和活性,而且这种抑制效应是通过RPS14结合HDM2的中间酸性结构域来抑制p53的多聚泛素化降解。 更为重要的是,本研究发现hCINAP能明显抑制由RPS14介导的p53的稳定性和活性。RPS14能被类泛素化小分子NEDD8修饰(NEDDylation),NEDDylation是RPS14正常的业细胞定位和自身的稳定性所必需的。我们发现,hCINAP通过招募去NEDDylation酶NEDP1来显著抑制RPS14的NEDDylation,导致RPS14的亚细胞定位发生改变和稳定性降低。从而使RPS14与HDM2的相互作用减弱,释放更多游离的HDM2结合p53,引起p53的泛素化降解。 此外,本研究还发现hCINAP在亚核结构Cajal body的形成、组蛋白的转录以及细胞凋亡中发挥重要作用。Cajal boay是真核生物体内一个多功能的亚核结构,其在体内的主要功能包括:拼接复合体snRNPs(spliceosomal small nuclearribonucleoproteins)的组装和修饰,端粒酶RNP的成熟以及参与组蛋白的转录。通过RNAi的方法降低hClNAP的表达,我们发现典型的亚核结构Caial body消失,并改变了coilin、SMN和fibrillarin在细胞内的定位,然而,对这些组分在蛋白表达水平没有影响。进一步分析发现,降低hCINAP的表达可以导致拼接体复合物snRNPs以及组蛋白转录因子NPAT在细胞核内的异常分布,并降低U snRNA和组蛋白的转录。最后,通过流式细胞仪分析发现hCINAP表达量降低以后导致细胞凋亡,并且检测到Caspase-3的活性升高。 综上所述,本研究不仅发现了RPS14在RP-HDM2-p53通路中的调节作用,更为重要的是,我们还发现并证实hCINAP是这条通路上游的一个重要调节蛋白。并且,hCINAP在亚核结构Caial body的形成、组蛋白的转录以及细胞凋亡中发挥重要作用。该研究不仅对人类蛋白hCINAP的功能有了更进一步的认识,而且为治疗癌症的药物提供了一个潜在的靶点。