论文部分内容阅读
目的:检测一种重要mRNA结合蛋白家族Hu Family(又名ELAVL家族)中唯一在人类各种组织广泛表达的成员HuR(ELAVL1)在正常胃黏膜、癌前病变及胃癌组织中的表达及定位,分析HuR和NF-κB在胃癌组织中表达的相关性,探讨HuR与胃癌临床病理因素的关系以及两者在胃癌发生发展和预后中的作用及意义。
方法:临床病理资料及组织芯片制作:收集中国医科大学附属第一医院外科手术切除胃癌组织237例,其中187例为同时收集距癌灶边缘大于5 cm处正常胃黏膜作为对照以及慢性萎缩性胃炎54例,肠上皮化生84例及异型增生25例。常规组织蜡块行4μm组织切片,常规HE染色,用于目标组织的定位。免疫组化染色及判定方法:采用PV9000免疫组化二步法检测胃癌及癌前病变中HuR和NF-κB的表达。鼠抗人HuR单克隆抗体(工作浓度为1:500)和兔抗人NF-κB多克隆抗体(工作浓度为1:600)均购自美国Santa Cruze公司,PV9000免疫组化检测试剂盒和氨基联苯胺(DAB)显色试剂盒购自北京中杉生物有限公司。采用组织芯片制作仪构建胃癌及癌前病变组织芯片蜡块,行4μm连续切片。采用柠檬酸修复液(pH6.0)高温高压修复抗原,PBS替代一抗做阴性对照。结果判定方法:HuR蛋白阳性反应为棕黄色颗粒定位于细胞浆和细胞核,NF-κB蛋白阳性反应为棕黄色颗粒主要在细胞浆,少数在细胞核。每个病例由两位观察者采用盲法随机选择2个高倍视野,计数200个细胞,染色强度(A)以阳性细胞呈色反应为准:无特异性着色为0分,浅棕色为1分,棕黄色为2分,深棕色为3分:染色的阳性细胞所占比例(B)按下列标准评定记分:阴性细胞或阳性细胞＜5％为0分,阳性细胞占5～25％为1分,阳性细胞占26％～50％为2分,阳性细胞51％～75％为3分,阳性细胞＞75％为4分。两种评分相乘(A×B),将结果分为:0分为阴性(-);1～4分为弱阳性(+);5～8分为中度阳性(++);9～12分为强阳性(+++),0～4分为阴性,5～12分为阳性。
结果:HuR蛋白在细胞浆中的表达从慢性萎缩性胃炎(8/54,14.81％)、肠上皮化生(35/84,41.67％)、异型增生(11/25,44.00％)到胃癌(111/237,46.84％)的阳性表达率逐渐升高,并均显著高于正常胃黏膜(2/187,1.14％);HuR在肠上皮化生和异型增生与胃癌以及肠上皮化生与异型增生的阳性表达比较未见显著统计学差异。HuR蛋白在肠上皮化生(35/84,41.67％),异型增生(11/25,44.00％)和在胃癌(111/237,46.84％)的表达高于在慢性萎缩性胃炎(8/54,14.81％)的阳性表达。HuR蛋白在胞浆的阳性表达率在大体分型中BorrmannⅢ+Ⅳ(99/193,,51.30％)高于BorrmannⅠ+Ⅱ(13/44,29.55％)中的表达。肿块的最大直径大于5 cm组(60/95,63.16％)的阳性表达率高于最大直径小于5 cm组(36/81,44.44％)。关于胃癌细胞的分化程度,HuR蛋白在高中分化组(45/83,54.22％)高于在低分化组(43/118,36.44％)的阳性表达率。按照TNM分期中淋巴结转移分期的划分,HuR蛋白在胃癌细胞胞浆阳性表达率在N1(40/103,38.83％),N2(34/57,59.65),N3(12/18,66.67)逐渐增高。HuR蛋白在远处转移组(45/79,56.96％)显著高于无远处转移组(66/158,41.77％)。但是,HuR在细胞浆中的表达与患者的年龄、性别、Lauren分型、浸润深度、淋巴结有无转移、无显著关联。
HuR蛋白在细胞核中的表达从肠上皮化生(42/84,50.00％)、异型增生(13/25,52.00％)到胃癌(130/237,54.85％)的阳性表达率均显著高于正常胃黏膜(48/187,25.67％);HuR蛋白在胃癌(130/237,54.85％)的表达高于在慢性萎缩性胃炎(19/54,35.19％)的阳性表达,而在肠上皮化生(42/84,50.00％)、异型增生(13/25,52.00％)与慢性萎缩性胃炎(19/54,35.19％)的阳性表达未见显著差异;在正常胃黏膜(48/187,25.67％)与慢性萎缩性胃炎(19/54,35.19％)的阳性表达率未见显著差异。HuR在肠上皮化生和异型增生与胃癌以及肠上皮化生与异型增生的阳性表达比较未见显著统计学差异。关于胃癌大体分型,在BorrmannⅠ+Ⅱ(13/44,29.55％)低于在BorrmannⅢ+Ⅳ中的表达(117/173,60.62％);而HuR在细胞核中的表达与患者的年龄、性别、肿块大小、细胞分化程度,Lauren分型、浸润深度、淋巴结有无转移以及淋巴结转移分期和远处转移都无显著关联。
NF-κB从慢性萎缩性胃炎(14/54,25.93％)、肠上皮化生(47/84,55.95％)、异型增生(17/25,68.00％)到胃癌(159/237,67.09％)的阳性表达率均显著高于正常胃黏膜(6/187,3.21％);HuR在肠上皮化生和异型增生与胃癌以及肠上皮化生与异型增生的阳性表达比较未见显著统计学差异。NF-κB蛋白在肠上皮化生(47/84,55.95％)、异型增生(17/25,68.00％)和在胃癌(159/237,67.09％)高于在慢性萎缩性胃炎(14/54,25.93％)的阳性表达。BorrmannⅢ+Ⅳ(137/193,74.54％)高于BorrmannⅠ+Ⅱ(22/44,50.00％)中的表达。在Lauren分型中,NF-κB蛋白在的阳性表达强度在肠型胃癌组(64/86,74.42％)高于在弥漫型胃癌组中的表达(79/129,61.24％)。另外,NF-κB蛋白的表达跟淋巴结转移个数相关,按照TMN分期系统中N分级,在N1(60/103,58.25％),N2(46/57,80.70),N3(16/18,88.89)逐渐增高。但是,NF-κB表达与胃癌患者的年龄、性别、肿块大小,细胞分化程度、浸润深度、淋巴结有无转移及远处转移都无显著关联。237例胃癌组织中HuR蛋白在细胞浆、细胞核的表达与NF-κB表达均呈正相关。
有完整随访资料的213例患者中,生存101例,死亡112例,总生存率47.42％,中位生存时间为38个月。单因素分析采用Kaplan Meier分析,HuR胞浆阴性和阳性的患者总生存率分别为47.3％和46.5％,平均生存时间分别为35.93±2.26months和30.17±2.09 months,总生存率无明显差异(P=0.14,log-rank检验).HuR胞核阴性和阳性的患者总生存率分别为43.0％和50.0％,平均生存时间分别为35.94±2.30 months和34.77±2.72 months,总生存率无明显差异(P=0.252,log-rank检验)。NF-κB表达阴性和阳性的患者总生存率分别为39.1％和50.7％,平均生存时间分别为34.51±2.60 months和31.86±1.84,总生存率无明显差异(P=0.827,log-rank检验)。采用COX回归模型(逐步后退法)进行多因素分析可见,患者的淋巴结转移N分期,远处转移是213胃癌的总生存率的独立危险因素,与HuR胞浆,胞核及总HuR表达,NF-κB的表达性别,年龄,Borrmann分型等因素无关。
结论:与正常胃粘膜相比,在胃癌癌前病变和胃癌组织中存在着HuR胞浆表达和NF-κB蛋白表达的上调,表明两者可能都参与了胃癌发生过程;同时,两者在肠上皮化生显著上调,且均有肠型胃癌显著高于弥漫型胃癌的中的表达的趋势,提示HuR胞浆表达和NF-κ可能与肠分化表型相关联,其可能参与了胃黏膜的肠型胃癌的发生。。虽然HuR胞浆和胞核的表达均与Borrmann分型较高相关,但是HuR胞浆还与肿块直径的增大和淋巴结转移亚组的N分期、远处转移相关,提示HuR胞浆表达可能参与了胃癌的生长,侵袭和转移,而胞核表达与胃癌其它的生长侵袭和转移的病理因素都不相关。NF-κB与Borrmann分型和淋巴结转移亚组的N分期相关,表明NF-κB增强了胃癌细胞的侵袭力和淋巴结转移程度。
胃癌组织中HuR蛋白在细胞浆和胞核中的表达均与NF-κB表达呈正相关,提示HuR蛋白可能参与PI3K/AKT/NF-κB调节途径在促进胃癌细胞增殖及肿瘤细胞侵袭及转移中发挥重要作用。在胃癌患者的预后方面,本研究没有显示HuR和NF-κB的表达与其密切相关,需要进一步研究。