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目的: 研究枸杞多糖与雷公藤多苷含药血清对SD大鼠睾丸细胞增殖率及SCF、C-kit、Caspase-3表达的影响;研究枸杞多糖对雷公藤多苷所致SD幼鼠雄性生殖损伤的干预途径。 方法: 1.细胞培养将成年雄性SD大鼠随机分为3组,分别给予双蒸水0.5ml·100g-1(空白组)、雷公藤多苷片0.9mg·100g-1(GTW组)、枸杞多糖16mg·100g-1和雷公藤多苷片0.9mg·100g-1(混合药物组)每日1次灌胃,连续1周。于末次灌胃2h后麻醉,心脏采血,制备含药血清。主要用胰蛋白酶和胶原酶二步消化法分离并提取10天内新生SD大鼠睾丸细胞进行原代培养。将细胞分为4组,分别是空白组、GTW组、混合药物组及FBS组,MTT法观察相应含药血清干预24h、48h后各组细胞增殖率,免疫细胞化学法检测干预24h后各组细胞SCF、C-kit、Caspase-3表达。 2.动物实验将3周龄雄性SD大鼠随机分为3组,分别给予双蒸水0.5ml·100g-1(空白组)、雷公藤多苷片0.9mg·100g-1(GTW组)、枸杞多糖16mg·100g-1和雷公藤多苷片0.9mg·100g-1(混合药物组)每日1次灌胃,连续8周。末次灌胃2h后,每组随机各取8只大鼠,处死,摘取睾丸,Bouin液固定睾丸;光镜下观察睾丸组织形态学改变;免疫组织化学法检测Bax、Bcl-2表达;原位末端标记法检测生精细胞凋亡。将剩余所有大鼠分笼喂养,按照雌雄1:1比例配对,15天后取出雄性大鼠,继续饲养雌鼠至产仔,记录配对雌鼠受孕、产仔情况。 结果: 1.细胞培养实验结果 1.1细胞的生长增殖24h、48h各组活细胞反应的OD值组间比较均有显著性差异(p<0.05);混合药物组OD值均显著高于GTW组(p<0.05),而与空白组比较,差异没有统计学意义(p>0.05)。 1.2SCF的表达混合药物组明显高于GTW组,差异有统计学意义(p<0.05);GTW组明显低于空白组、FBS组,差异比较有统计学意义(p<0.05);混合药物组、空白组及FBS组三组比较,呈增高趋势,没有显著的统计学差异(p>0.05)。 1.3C-kit的表达各组间比较差异有统计学意义(p<0.05);混合药物组表达显著高于GTW组、FBS组,差异比较有统计学意义(p<0.05),与空白组比较差异没有统计学意义(p>0.05)。 1.4Caspase-3的表达各组间比较差异较显著(p<0.05);GTW组的表达明显高于其它3组(p<0.05);混合药物组与FBS组比较有统计学意义(p<0.05),与空白组比较差异无统计学意义(p>0.05)。 2.动物实验结果 2.1睾丸组织形态学改变光镜下可见,与空白组比较,GTW组大鼠睾丸组织生精上皮变薄,生精细胞数量减少,排列紊乱,部分生精小管腔内空虚,可见发育成熟的精子但排列紊乱,有较大的空隙;混合药物组大鼠曲细精管内各级生精细胞排列略稀疏,支持细胞胞质略萎缩,可见发育成熟的精子。 2.2睾丸组织Bax的表达各组间比较差异具有统计学意义(p<0.05);GTW组的表达显著高于其余两组(p<0.05);混合药物组的表达较空白组显著增高(p<0.05)。 2.3睾丸组织Bcl-2的表达各组间比较差异无统计学意义(p>0.05);表达强度从高到低依次为GTW组、混合药物组、空白组。 2.4睾丸组织生精细胞凋亡各组间比较差异具有统计学意义(p<0.05);空白组大鼠的睾丸组织内仅有极少量生精细胞凋亡,为正常生理状态下凋亡的生精细胞;GTW组大鼠睾丸组织内出现较多凋亡的生精细胞,表达强度显著高于正常组(p<0.05);混合药物组同样可以看到凋亡的生精细胞,表达强度上明显低于GTW组(p<0.05)。 2.5生育力结果各组间比较差异无统计学意义(p>0.05);空白组、GTW组雌鼠受孕率高于混合药物组;平均产仔个数,GTW组较空白组减少,混合药物组较GTW组增多。 结论: 1.雷公藤多苷对雄性有生殖损伤,推测其机制是通过抑制生精细胞增殖、下调生精细胞中SCF与C-kit表达来实现的; 2.枸杞多糖可以抑制雷公藤多苷的生殖损伤作用,其作用途径是促进雷公藤多苷引起的SCF与C-kit低表达以及生精细胞凋亡的修复。