【摘 要】
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背景与目的:我们前期体外细胞实验发现敲除Plac8基因可显著增强鼻咽癌细胞对放射线的敏感性。本研究通过组织芯片研究Plac8表达与鼻咽癌患者生存预后的关系;通过裸鼠移植瘤模型来探讨敲除Plac8基因对在体鼻咽癌的放疗增敏作用及其分子机制。方法:1.采用免疫组织化学技术,检测120例鼻咽癌组织和30例慢性鼻咽炎组织中Plac8的表达情况;分析Plac8基因的表达与鼻咽癌患者生存预后的关系。2.体外培
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背景与目的:我们前期体外细胞实验发现敲除Plac8基因可显著增强鼻咽癌细胞对放射线的敏感性。本研究通过组织芯片研究Plac8表达与鼻咽癌患者生存预后的关系;通过裸鼠移植瘤模型来探讨敲除Plac8基因对在体鼻咽癌的放疗增敏作用及其分子机制。方法:1.采用免疫组织化学技术,检测120例鼻咽癌组织和30例慢性鼻咽炎组织中Plac8的表达情况;分析Plac8基因的表达与鼻咽癌患者生存预后的关系。2.体外培养永生化鼻咽部上皮细胞系NP69和5株人源鼻咽癌细胞系（CNE-2、HK1、SUNE1、5-8F、6-10B）;利用RT-PCR技术检测鼻咽癌细胞株中Plac8的转录水平。3.体外培养CNE-2细胞和Plac8敲除的CNE-2细胞（ko PLAC8 CNE-2）并接种于裸鼠皮下成瘤;将两组裸鼠分别暴露于8GY的射线之下照射一次,建立裸鼠荷瘤的放疗模型。实验分为IR+CNE-2组（对照组）和IR+ko PLAC8 CNE-2组（实验组）。4.定期定时观察、测量及记录裸鼠荷瘤的体积变化,分析敲除Plac8基因对体内鼻咽癌细胞放疗敏感性的影响。5.采用免疫荧光技术检测瘤体中γH2AX、Bax和Bcl-2的表达差异。6.采用免疫组织化学技术检测瘤体中γH2AX、Bax和Bcl-2的表达差异。7.应用Western blotting技术检测瘤体组织中Plac8、γH2AX、Bax、Bcl-2和Caspase-3蛋白的表达差异。结果:组织芯片结果显示:与慢性鼻咽炎（NPG）标本阳性表达率46.7%（14/30）相比,鼻咽癌（NPC）标本中Plac8阳性表达率84.2%（101/120）明显升高（P＜0.01）。Plac8表达高的鼻咽癌患者预后更差（P＜0.01）。2.与NP69细胞相比,人鼻咽癌细胞系的Plac8均具有较高的转录水平（P﹤0.05）;3.我们成功建立了裸鼠皮下移植瘤放疗模型。4.在进行放射治疗之前,IR+CNE-2组和IR+ko PLAC8 CNE-2组的荷瘤体积逐渐增大,但是IR+ko PLAC8 CNE-2组肿瘤生长较IR+CNE-2组生长稍缓慢。待接受放疗后第10天处死裸鼠时发现:两组裸鼠的移植瘤平均体积分别为（1.571±0.055）cm~3和（0.533±0.132）cm~3（P＜0.05）;两组的移植瘤平均重量分别为（0.82±0.08）g和（0.21±0.04）g（P＜0.01）;通过公式计算得出IR+ko PLAC8 CNE-2组的抑瘤率为75.0%。5.免疫荧光（IF）染色结发现:IR+ko PLAC8 CNE-2组的γH2AX和Bax的荧光强度高于IR+CNE-2组,而Bcl-2的荧光强度则低于IR+CNE-2组。6.免疫组化染色结果显示:IR+ko PLAC8 CNE-2组的γH2AX和Bax平均光密值均显著高于IR+CNE-2组（P＜0.01,P＜0.05）,而Bcl-2的平均光密度值则正好相反（P＜0.01）。7.Western blotting实验结果显示:IR+ko PLAC8 CNE-2组的Plac8几乎不表达（P＜0.01）;γH2AX、Bax及Caspase-3等蛋白水平表达明显增高（P＜0.01）,抗凋亡蛋白Bcl-2的表达明显降低（P＜0.05）。结论:1.敲除Plac8基因可通过促进凋亡增加在体鼻咽癌细胞的放射敏感性,是鼻咽癌放疗增敏的一个有效靶点。2.Plac8高表达的鼻咽癌患者存活时间缩短与其对放射治疗敏感性更低有关。
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