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实验目的体外研究Rho激酶抑制剂法舒地尔对白血病细胞系K562细胞增殖、凋亡、黏附分子表达作用，初步阐明法舒地尔在抗白血病作用的可能机制，为临床上将法舒地尔作为治疗白血病的新药提供理论基础。实验材料与实验方法将法舒地尔的浓度设为0、50、100、150umol/L，监测时间范围为0-24(0、6、12、24小时)；K562白血病细胞株为陕西省人民医院血液内科实验室所常规传代保留的；用MTT法来检测法舒地尔对K562白血病细胞增殖的影响作用；用光学显微镜观察法舒地尔处理后K562细胞形态的变化；用DAPI染色后荧光显微镜观察细胞核形态的变化；用流式细胞仪分析早期和晚期凋亡率、Fas/FASL阳性表达率及粘附分子CD54在K562细胞表面的表达率；蛋白免疫印迹法检测Casepase-3、PARP蛋白的表达；RT-PCR法检测其对VEGF165mRNA的表达的变化。实验结果1.MTT法检测法舒地尔对K562细胞生长的抑制作用：不同浓度的法舒地尔（0、50、100、150umol/L）在6、12、24h均能抑制K562细胞的增殖，且具有时间和浓度的依赖性；2.光学显微镜和荧光显微镜下（DAPI染色后）观察细胞形态的变化：不同浓度的法舒地尔（0、50、100、150umol/L）处理K562细胞6h后观察细胞形态变化，50umol/L的实验组中部分细胞形态变得不规则，发生变化；100umol/L实验组中的细胞数量较前减少，更多的细胞出现形态变化，染色质浓缩、核固缩、核边集，出现较多的凋亡小体；150umol/L实验组的细胞数量减少的更加显著，出现细胞核固缩的细胞增多，胞质中可见大量的凋亡小体、细胞碎片和形成许多空泡，而对照组的细胞形态完整均匀，折光性好；3.流式细胞仪检测凋亡率：流式细胞仪检测各个监测时间点的对照组细胞早期及晚期凋亡百分率是（1.62±0.34）%（6h）,（1.98±0.04）%（12h）,（2.24±0.11）%（24h），实验组的细胞早期及晚期凋亡百分率分别是（6.12±0.43）%(6h、50umol/L)、（8.78±0.49）%（6h、100umol/L）、（10.92±0.62）%（6h、150umol/L）、（7.9±0.58）%（12h、50umol/L）、（19.73±1.29）%（12h、100umol/L）、（29.4±0.81）%（12h、150umol/L）、（20.97±0.96）%（24h、50umol/L）、（36.03±6.28）%（24h、100umol/L）、（51.18±1.45）%（24h、150umol/L）；可见不同浓度的法舒地尔用相同时间处理细胞后，通过彼此间的比较可发现差异有统计学意义（P＜0.05），相同浓度的法舒地尔作用不同时间，通过彼此间的比较可发现差异有统计学意义（P＜0.05）；4.流式细胞术检测Fas及FASL表达率：不同浓度法舒地尔处理6h后Fas表达率分别是(6.8±0.61)%（50umol/L）、(11.25±1.06)%（100umol/L）、(12.4±1.25)%（150umol/L），FASL表达率分别是(67.4±6.79)%（50umol/L）、(70.5±1.95)%（100umol/L）、(72.5±1.83)%（150umol/L），对照组的FASL、Fas表达率(0.23±0.15)%、(0.4±0.1)%；检测结果示:在一定时间内随药物浓度的增加,FASL及Fas表达率分别增加；分别将各个实验组Fas、FASL和对照组的Fas、FASL比较差异有显著的统计学意义（P＜0.05），而将100umol/L细胞组与150umol/L细胞组Fas的阳性表达率比较差异无统计学意义（P＞0.05），而各个实验组彼此间FASL的比较差异无统计学意义（P＞0.05）；5.流式细胞术检测粘附分子CD54的表达率：未处理的正常对照组CD54的表达率为（97.34±0.70）%，而50umol/L的表达率为（91.21±1.94）%；100umol/L的表达率为（77.84±1.03）%，150umol/L的表达率为（53.36±1.80）%；可见不同浓度法舒地尔处理各组细胞，其各组CD54的表达率比较差异有显著的统计学意义（P＜0.05）；6.RT-PCR法检测VEGF165mRNA的表达：以不同的浓度的法舒地尔处理K562细胞6h后，将这些实验组同对照组相比可发现VEGF165mRNA的表达下调，表明K562细胞经法舒地尔的处理后其VEGF165mRNA的表达因剂量增加而下调且呈明显的剂量依赖性；7.Western blot法检测：空白对照组的Casepase-3、PARP活化水平很低，实验组处理6h后Cleaved Casepase-3在100umol/L开始出现，150umol/L达高峰；PARP的活化片段在50umol/L是开始出现并随着剂量增加其表达量也增加；实验结论法舒地尔可以抑制K562细胞的增殖，在此基础上探讨了其抗白血病可能的相关机制，以上各项实验结果为其将来临床上治疗白血病提供了良好的实验依据和理论基础，因此我们有理由认为法舒地尔有希望成为一种新的抗白血病药物，但其在临床上能否得到广泛认可还需要进一步深入的研究探讨。