【摘 要】
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目的:探究靶向性敲低脊髓前角运动神经元中单磷酸腺苷活化蛋白激酶（adenosine monophosphate-activated protein kinase,AMPK）的表达对急性运动轴索型神经病（acute motor axonal neuropathy,AMAN）小鼠模型轴索再生的影响,为临床上AMAN的治疗研究提供思路。方法:构建腺相关病毒2（Adeno-associated virus
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目的:探究靶向性敲低脊髓前角运动神经元中单磷酸腺苷活化蛋白激酶（adenosine monophosphate-activated protein kinase,AMPK）的表达对急性运动轴索型神经病（acute motor axonal neuropathy,AMAN）小鼠模型轴索再生的影响,为临床上AMAN的治疗研究提供思路。方法:构建腺相关病毒2（Adeno-associated virus 2,AAV2）载体。选取经鉴定的5-7周龄GD3s-/-小鼠,分为AMPK敲低组（AMPK knockdown）和对照AAV2组（Control-AAV2）,向AMPK敲低组胫骨前肌注射AMPK knockdown-AAV2来靶向性敲低前角运动神经元中AMPK的表达,对照AAV2组注射Control-AAV2。2周后,通过坐骨神经挤压+腹腔注射抗GM1 Ig G抗体来构建AMAN小鼠模型。通过脊髓AMPK免疫荧光来验证是否成功敲低AMPK的表达。通过坐骨神经GM1免疫荧光来验证抗GM1 Ig G抗体是否结合到神经纤维上。通过步态实验来评估AMAN小鼠的运动功能恢复情况。通过坐骨神经复合肌肉动作电位的波幅和潜伏期来评估神经传导功能恢复情况。通过神经丝蛋白200和髓鞘碱性蛋白免疫荧光染色来评估神经纤维的再生。结果:1.AMPK免疫荧光:与对照AAV2组相比,AMPK敲低组前角运动神经元中AMPK的表达被显著敲低（23.29±13.05 v.s.36.59±18.43,P=0.016）。2.抗GM1 Ig G抗体免疫荧光:两组的所有AMAN小鼠坐骨神经均有明显的抗GM1 Ig G抗体结合。3.步态实验:AMPK敲低组的平均接触强度大于对照AAV2组（156.20±8.36 v.s.146.40±12.31,P=0.023）,步宽小于对照AAV2组（0.86±0.14 v.s.0.97±0.12,P=0.033）,步轴角小于对照AAV2组（24.52±6.82 v.s.29.47±5.70,P=0.040）,边缘负载大于对照AAV2组（39.77±18.87 v.s.27.17±8.95,P=0.020）。4.电生理:AMPK敲低组的复合肌肉动作电位波幅显著大于对照AAV2组（21.61±3.62 v.s.16.58±4.02,P＜0.0001）,两组的潜伏期没有统计学差异（2.47±0.36 v.s.2.73±0.73,P=0.132）。5.AMPK敲低组的神经丝蛋白200平均荧光强度大于对照AAV2组[15.50（5.78）v.s.9.73（5.04）,P＜0.0001],髓鞘碱性蛋白平均荧光强度也大于对照AAV2组[29.09（22.89）v.s.13.47（10.31）,P＜0.0001]。结论:1.本研究所构建AAV2载体能有效感染AMAN小鼠前角运动神经元,并显著敲低其AMPK的表达。2.靶向性敲低前角运动神经元中AMPK的表达可以促进AMAN小鼠的运动神经轴索再生,从而促进运动功能的恢复,靶向性敲低AMPK的表达是治疗AMAN患者的潜在策略。
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