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目的探讨炎性细胞因子IL-1β对β-TC-6细胞葡萄糖刺激下胰岛素分泌反应的影响。方法1、p-TC-6细胞接种于24孔板,48小时后换用无糖KRBH缓冲液培养0.5小时,分别于含OmM、1.38mM、5.5mM葡萄糖的KRBH缓冲液中孵育1小时,收集上清,放射免疫分析法测胰岛细胞上清液中胰岛素浓度。2、β-TC-6细胞接种于24孔板,24小时后分别加入终浓度为0.15ng/ml、1.5ng/ml、15ng/ml的IL-1β作用24小时,再换用无糖KRBH缓冲液培养0.5小时,再在含1.38mM葡萄糖的KRBH缓冲液中孵育1小时,收集上清,放射免疫分析法测胰岛细胞上清液中胰岛素浓度。结果1、p-TC-6细胞在1.38mM葡萄糖刺激时胰岛素分泌水平达高峰,较无葡萄糖刺激时升高55%[(70.31±1.56)对(45.23±4.07)uIU/ml, t=25.085,p<0.05];5.5mM葡萄糖刺激下的胰岛素浓度较无葡萄糖刺激时升高29%[(58.32±1.93)对(45.23±4.07)uIU/ml, t=13.090,p<0.05],较1.38mM葡萄糖刺激时低21%[(58.32±1.93)对(70.31±1.56)uIU/ml, t=11.995,p<0.05]。2、β-TC-6细胞在含0.1%BSA的无糖KRBH液中孵育60min,空白对照组的胰岛素浓度为(62.30±2.24)uIU/ml,单纯葡萄糖刺激组的胰岛素浓度为(108.13±3.71)uIU/ml, IL-1β(0.15ng/ml)组葡萄糖刺激下胰岛素浓度为(83.76±1.16) uIU/ml, IL-1β (1.5ng/ml)组葡萄糖刺激下胰岛素浓度为(59.46±3.20) uIU/ml, IL-1β(15ng/ml)组葡萄糖刺激下胰岛素浓度为(56.98±1.19) uIU/ml。各组间比较,差异有统计学意义(F=714.573, P<0.05)。IL-1β15ng/ml组对p-TC-6细胞GSIS抑制最明显,胰岛素释放量较单纯糖刺激组低47%[(56.98±1.19)对(108.13±3.71)uIU/ml, t=18.591,p<0.05]。结论β-TC-6细胞胰岛素释放最适宜的葡萄糖刺激浓度为1.38mM; IL-1β可抑制β-TC-6细胞葡萄糖刺激下的胰岛素分泌,作用与IL-1p剂量呈正相关。目的探讨ERK1/2信号转导通路在IL-1β抑制p-TC-6细胞葡萄糖刺激下胰岛素分泌反应中的作用。方法1、β-TC-6细胞接种于6孔板,48小时后换用无糖KRBH缓冲液培养0.5小时,分别于含OmM.1.38mM、5.5mM葡萄糖的KRBH缓冲液中孵育5分钟,收集细胞,用蛋白质免疫印迹法检测磷酸化ERK1/2的水平。2、p-TC-6细胞接种于6孔板,24小时后分别加入终浓度为0.15ng/ml、1.5ng/ml、15ng/ml的IL-1β作用24小时,再换用无糖KRBH缓冲液培养0.5小时,再在含1.38mM葡萄糖的KRBH缓冲液中孵育5分钟,收集细胞,用蛋白质免疫印迹法检测磷酸化ERK1/2的水平。结果1、1.38mM、5.5mM葡萄糖均能刺激p-TC-6细胞ERK1/2磷酸化,1.38mM葡萄糖刺激时ERK1/2磷酸化水平最强,5.5mM葡萄糖刺激时ERK1/2磷酸化水平较1.38mM时减弱。2、IL-1p可抑制p-TC-6细胞葡萄糖刺激下的ERK1/2磷酸化,15ng/ml IL-1β对p-TC-6细胞葡萄糖刺激下的ERK1/2磷酸化抑制作用最强。结论1、葡萄糖刺激可活化p-TC-6细胞ERK1/2信号转导通路。2、IL-1p可抑制p-TC-6细胞葡萄糖刺激下的ERK1/2活化,抑制作用与IL-1p的浓度成正相关。目的探讨GLP-1受体激动剂Exendin-4对炎性细胞因子IL-1β抑制β-TC-6细胞GSIS的保护作用。方法1、β-TC-6细胞接种于24孔板,培养24小时后分别加入不同浓度的IL-1β(终浓度分别为0.15ng/ml、1.5ng/ml、15ng/ml)和不同浓度的Exendin-4(终浓度分别为0.lnmol/ml、1nmol/ml)作用24小时,再换用无糖KRBH缓冲液培养0.5小时,再在含1.38mM葡萄糖的KRBH缓冲液中孵育1小时,收集上清,放射免疫分析法测胰岛细胞上清液中胰岛素浓度。2、β-TC-6细胞接种于24孔板,培养24小时后加入0.15ng/ml的IL-1β培养24小时,分别于加入IL-Iβ前2h、同时、后18h、后22h加入lnmol/ml的Exendin-4,再换用无糖KRBH缓冲液培养0.5小时,再在含1.38mM葡萄糖的KRBH缓冲液中孵育1小时,收集上清,放射免疫分析法测胰岛细胞上清液中胰岛素浓度。3、β-TC-6细胞接种于6孔板,培养24小时后加入0.15ng/ml的IL-1β培养24小时,分别于加入IL-1β前2h、同时、后18h、后22h加入lnmol/ml的Exendin-4,再换用无糖KRBH缓冲液培养0.5小时,再在含1.38mM葡萄糖的KRBH缓冲液中孵育5分钟,收集细胞,用蛋白质免疫印迹法检测磷酸化ERK1/2的水平。结果1、β-TC-6细胞无糖刺激组的胰岛素浓度为(56.97±1.20) uIU/ml,1.38mM葡萄糖刺激组的胰岛素浓度为(94.22±4.09)uIU/ml,IL-1β(0.15ng/ml)组葡萄糖刺激下胰岛素浓度为(70.16±2.56) uIU/ml, IL-1β(1.5ng/ml)组葡萄糖刺激下胰岛素浓度为(68.32±0.94) uIU/ml, IL-1β (15ng/ml)组葡萄糖刺激下胰岛素浓度为(55.09±1.46) uIU/ml。IL-1β(0.15ng/ml), Ex-4(0. lnmol/ml)组葡萄糖刺激下胰岛素浓度为(70.65±1.20) uIU/ml, IL-1β (1.5ng/ml)、Ex-4(0.1nmol/ml)组葡萄糖刺激下胰岛素浓度为(64.25±1.44)uIU/ml, IL-1β (15ng/ml)、Ex-4(0.1nmol/ml)组葡萄糖刺激下胰岛素浓度为(61.99±0.66) uIU/ml, IL-1β(0.15ng/ml)、Ex-4(1nmol/ml)组葡萄糖刺激下胰岛素浓度为(77.23±0.69)uIU/ml, IL-1β(1.5ng/ml)、Ex-4(1nmol/ml)组葡萄糖刺激下胰岛素浓度为(60.34±3.66)uIU/ml,IL-1β(15ng/ml).Ex-4(1nmol/m1)组葡萄糖刺激下胰岛素浓度为(59.48±1.94)uIU/ml.各组间比较,差异有统计学意义(F=55.686,P<0.05).2、β-TC-6细胞无糖刺激组的胰岛素浓度为(43.61±1.68)uIU/ml,1.38mM葡萄糖刺激组的胰岛素浓度为(83.95±0.17)uIU/ml,IL-1β(0.15ng/ml)组葡萄糖刺激下胰岛素浓度为(49.04±0.21)uIU/ml.加入IL-1β(0.15ng/ml)之前2小时加入Ex-4(1nmol/ml)组葡萄糖刺激下胰岛素浓度为(74.45±5.98)uIU/ml,加入IL-1β(0.15ng/ml)同时加入Ex-4组葡萄糖刺激下胰岛素浓度为(60.71±4.35)uIU/ml.葡萄糖刺激前6小时加入Ex-4组葡萄糖刺激下胰岛素浓度为(60.21±2.39)uIU/ml,葡萄糖刺激前2小时加入Ex-4组葡萄糖刺激下胰岛素浓度为(56.70±0.78)uIU/ml.各组间比较,差异有统计学意义(F=42.806,P<0.05)。3、IL-1β可抑制β-TC-6细胞葡萄糖刺激下的ERK1/2磷酸化,在IL-1β加入前2h、同时、后18h、后22h加入Exendin-4组β-TC-6细胞葡萄糖刺激下的ERK1/2磷酸化可恢复。结论1、Exend in-4可保护IL-1β抑制β-TC-6细胞葡萄糖刺激下的胰岛素分泌反应,作用可能与Exendin-4的剂量、IL-1β的浓度及两者作用的先后有关。2、Exendin-4保护IL-1β抑制β-TC-6细胞葡萄糖刺激下的胰岛素分泌反应的机制可能与恢复ERK1/2的活化有关。