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目的:卵巢癌是妇科恶性程度最高、预后较差的肿瘤之一,目前,顺铂获得性耐药是卵巢癌治疗失败的主要原因之一。肿瘤获得性耐药与肿瘤微环境密切相关,肿瘤相关成纤维细胞（Cancer-associated fibroblasts,CAFs）是肿瘤微环境的重要组成部分。CAFs主要通过旁分泌形式促进肿瘤细胞的增殖、侵袭和转移。同时,CAFs通过与其他间质细胞互相作用,调节肿瘤血管生成及肿瘤免疫。因此,本文将探索CAFs对卵巢癌顺铂敏感性的影响及其作用机制。方法:1.本研究通过磁珠分选法从人卵巢癌组织标本中提取CAFs,利用流式细胞技术鉴定提取的CAFs纯度;利用酶消化法从人卵巢癌组织中获得人原代卵巢癌细胞（ID:6314622;ID:6309100）,此外还选择两种卵巢癌细胞系A2780、HEY 进行研究。收集 CAFs 的上清液（Conditioned medium of CAFs,CAFs-CM）与新鲜的高糖培养基1:1混合制成共培养的混合培养基（MIX 1:1）;2.通过CCK-8法检测与CAFs上清液共培后对卵巢癌细胞顺铂敏感性的影响;3.利用流式细胞技术检测不同培养条件下顺铂诱导的细胞凋亡率;4.通过生物信息学分析筛选出在CAFs中高表达的Wnt5a并通过反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）、酶联免疫吸附试验（Elisa）、蛋白免疫印迹（Western blot）进行验证;5.利用Transwell 6孔板进行CAFs和卵巢癌细胞共培养,并用Elisa检测共培养组和未共培组的Wnt5a的表达;6.运用Western blot技术检测细胞在不同培养条件下抗凋亡蛋白Bcl-2、Akt磷酸化（p-Aktser473）的表达,探求影响卵巢癌顺铂敏感性的可能机制;7.最后构建卵巢癌细胞（Ovarian Cancer,OC）、OC+CAFs（10:1）及 OC+CAFs（10:1）+Box5三组裸鼠皮下荷瘤模型,研究CAFs及其分泌的Wnt5a在体内对肿瘤生长及顺铂敏感性的影响。结果:1.流式细胞术鉴定结果提示通过磁珠分选出的阳选细胞为CAFs且CAFs纯度＞99%;2.CCK-8实验结果显示CAFs-CM共培后顺铂的IC50明显上调（P值分别为P=0.0088,P=0.0291,P=0.0018,P=0.0298）,说明 CAFs-CM 降低了卵巢癌细胞对顺铂的敏感性;3.细胞凋亡实验结果显示加入顺铂后,细胞凋亡率明显上调,而在CAFs-CM共培后凋亡率明显下降（P值分别为:P=0.0057;P=0.0043;P=0.0324;P=0.0237）,提示CAFs-CM对顺铂诱导的卵巢癌细胞凋亡有保护作用;4.Western blot检测Bcl-2蛋白的表达显示CAFs-CM共培后Bcl-2的表达量显著增加,提示CAFs-CM可促进抗凋亡蛋白Bcl-2的表达;5.生物信息学分析发现Wnt5a在CAFs中高度富集,并通过RT-PCR、Elisa、Western blot 验证;6.Transwell共培结果显示未共培养的四组卵巢癌细胞较CAFs相比,Wnt5a表达量均很低（P值分别为:P=0.0016;P=0.0019;P=0.0039;P=0.0316）,在共培养48h后,卵巢癌上清液中的Wnt5a的表达量均有显著升高（分别为P=0.0038,P=0.0062,P=0.0145,P=0.0316）,提示Wnt5a在卵巢癌细胞中低表达,CAFs分泌的Wnt5a可能影响卵巢癌细胞生物学功能;7.外源性加入酪氨酸激酶受体2（ROR2）受体的抗体（anti-ROR2）后,CAFs-CM共培组顺铂的IC50上调的趋势被抑制（P值分别为:P=0.0486;P=0.0474;P=0.0448;P=0.0327）,发生细胞凋亡的比例则明显上调（P值分别为:P=0.0017;P=0.0056;P＜0.0001;P=0.0447）,提示阻断 Wnt5a 受体 ROR2 减弱CAFs对卵巢癌的保护作用;8.Western blot结果显示CAFs增加Akt磷酸化（p-Aktser473）的表达,加入anti-ROR2后p-Aktser473的表达量明显下降,加入LY294002可进一步逆转Wnt5a诱导的Akt的磷酸化。提示Wnt5a可能通过PI3K/Akt通路抑制卵巢癌细胞对顺铂的敏感性;9.裸鼠荷瘤结果显示OC+CAFs组较对照组肿瘤体积明显增大,而在注射Wnt5a抑制剂Box5后肿瘤生长受到明显抑制。结论:1.肿瘤微环境中的CAFs可能参与促进肿瘤细胞增殖,减少细胞凋亡,降低卵巢癌对顺铂的敏感性;2.Wnt5a在CAFs中高度富集,其可能是CAFs影响卵巢癌顺铂敏感性的重要参与者;3.抑制肿瘤微环境中的Wnt5a可增加卵巢癌对顺铂的敏感性;4.Wnt5a可能通过影响肿瘤细胞的PI3K/Akt信号通路降低卵巢癌细胞对顺铂的敏感性;