机体的组织和细胞对于外来刺激的炎症免疫反应受一系列基因表达调控，转录因子对基因表达起着开或关的作用。核转录因子kappa B(nuclear factor kappa B,NF-κB)被认为是参与炎症反应基因转录的重要蛋白质分子，当受到外界因素刺激时，组织细胞胞浆内的NF-κB含量增加，其与抑制蛋白IκB分离并活化，进入细胞核与靶基因的κB基序结合，以调节包括细胞因子和炎症介质在内的众多蛋白质表达，从而在炎症免疫反应中发挥“中枢”转录调控作用。阻断NF-κB激活(如抗氧化剂的使用)将为炎症性疾病的治疗提供新的思路。在牙髓、尖周和牙周组织炎症中，细菌感染引起炎症因子的大量释放，其作用机制的研究是牙髓尖周病学的重要课题之一。本研究的目的是观察核转录因子NF-κB在实验性鼠牙髓炎，根尖周炎，人正常和炎症牙髓中的表达变化；观察核转录因子NF-κB在LPS诱导体外培养的人牙髓细胞、牙周膜细胞和牙龈成纤维细胞的激活，及NF-κB的抑制剂(抗氧化剂PDTC)对LPS诱导牙髓细胞、牙周膜细胞合成IL-6的影响，从而为研究探讨NF-κB调控牙髓、根尖周和牙周炎症的作用机理提供实验依据。主要研究内容及结果如下： 1．NF-κB在鼠实验性牙髓炎中的表达变化。 采用髓室开放的方法成功建立鼠实验性牙髓炎模型，用免疫组化的方法观察NF-KB在不同阶段鼠实验性牙髓炎组织中的表达。结果表明：正常鼠牙髓组织中NF-κB以非活化形式存在于组织细胞胞浆中，在实验性牙髓炎模型中NF-κB的表达区域以炎症区域为主，邻近穿髓点附近的炎症病灶内，NF-κB大量表达于炎症细胞胞浆及胞核中，在牙髓细胞中也大量表达。随着炎症的进展，部分组织坏死，NF-κB阳性表达的细胞由炎症中心向周边扩散，数量及阳性表达量也增加。血管内皮细胞及血管周围细胞NF-κB染 第。军巨大念巧土磅伍伶么 色呈强阳性。在牙髓炎症发展过程中 NFK B存在的这种时空表达特性，提 示在牙髓炎进程中始终有NF－KB调控作用的参与。 2．人正常及炎症牙髓组织中 NFK B的表达。 免疫组化研究表明，人牙髓在正常状态下，也散在分布染色阳性的较少 数细胞，在炎症牙髓中，阳性细胞分布于炎性区域及血管、巨噬细胞，NF－ KB染色阳性区域与大鼠相似，但阳性染色较大鼠牙髓炎模型弱。 3．NF．K B eA在实验性鼠根尖周炎中的表达变化。 建立实验性鼠根尖周炎模型，采用 RTPCR方法检测 NF。B mRNA在 实验性鼠根尖周炎中的表达变化。结果表明：在未处理组和牙髓暴露3d组 根尖周组织中 NF－K B tA表达极少，NF－K B M在牙髓暴露 7d后即 可明显检测到，7d—14d NF－K B InRNA表达随炎症发展而递增，28d开始 回落。此结果说明 NF－K B InRNA的表达量与根尖周炎症的病变发展过程密 切相关。 4．NF－K B在内毒素脂多糖（LPS）诱导体外培养的人牙髓细胞、牙周膜细 胞和牙龈成纤维细胞活性的变化。 本实验通过免疫组化和图像分析法，观察NF－KB在不同浓度及不同作 用时间点LPS诱导体外培养的人牙髓细胞、牙周膜细胞和牙龈成纤维细胞 活性的变化。H种细胞在无刺激因于作用时，NF－。B的基础表达量较低， 仅少量表达于细胞胞浆中。LPS以 10 u g／Inl作为有效刺激浓度，动态观察 在不同时间点H种细胞中 NF－K B激活发生核转位的情况，结果表明在LPS 刺激下，开始时 NFK B蛋白合成增加，胞浆着色加深。刺激 3h后，NF－ KB激活，部分发生核转位，6h达峰值，12h仍有活性，24h反馈抑制胞核 基本无染色。将 LPS以不同的浓度作用于三种细胞，结果表明 10p g／IYl一 n g／ml的浓度都有可能是 NFJ B激活的有效浓度。上述结果说明 NF。B 可在LPS诱导体外培养的人牙髓细胞、牙周膜细胞和牙龈成纤维细胞中激 －3－ 第－军医大q硕十舍位恰大活发生核转位，且对LPS有时间和浓度依赖性。5．NFK B抑制剂 PDTC对 LPS诱导人牙髓细胞、牙周膜细胞合成IL－6的 影响。 本实验应用不同浓度 NF－k B的抑制剂 PDTC（抗氧化剂）与 LPS共同孵育体外培养的人牙髓细胞、牙周膜细胞，用酶联免疫测定法检测IL－6的合成。结果表明，单独的LPS作用能够有效刺激牙髓细胞、牙周膜细胞合成 IL－6；加入NF－K B的抑制剂PDTC后，IL－6的表达量与 PDTC的抑制作用呈浓度依赖性，＊＊＊C浓度为4卜M时IL6含量达到最低，与＊陀单独刺激组有显著差异①刃刀5卜 由此结果提示：＊Ps诱导牙髓细胞、牙周膜细胞合成IL－6的信号传导途径主要是通过激活NF－K B的途径实现的，抗氧化剂的应用是抑制 NF．K B激活的恃异性方法。通过抑制NF－K B的激活减少炎症介质的生成，进而减弱这些因于对组织的破坏作用，将为临床治疗牙髓炎、牙周炎、根尖周炎提