常规及小型化毛细管电泳—电化学检测在生物样品分析中的应用研究

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第一章绪论毛细管电泳具有分离效率高,快速和所需样品量少等特点。应用范围包括无机离子的分析、有机小分子分析、环境分析、食品分析、生物分析和药物分析等。在分析化学、生物化学、分子生物学、药物化学、食品化学、环境化学和医学等许多领域,有着广阔的应用前景。在绪论中阐述了毛细管电泳的基本原理,回顾了毛细管电泳的历史、现状、发展过程和趋势,主要特点和研究进展,重点对毛细管电泳—电化学检测法(CE-ED)进行了较为全面的综述。CE-ED作为一种新型高效的分离技术,上世纪得到了迅速的发展,但在21世纪仍然面临着极大的机遇和挑战,仪器需要进一步的改进和完善,需要在检测的重现性和灵敏度等方面有所突破。根据本论文的研究内容,重点综述了毛细管电泳在植物样品中活性成分和动物样品尤其是关系到食品安全的可食用肉制品中有毒有害物质的应用研究。本论文采用CE-ED技术,测定了几种植物样品以及动物样品中的活性成分,同时也将小型化毛细管电泳应用到分析检测中,探讨了毛细管电泳—电化学检测技术在食品安全领域的一些应用。第二章毛细管电泳—电化学检测法测定荠菜中五种营养成分采用毛细管电泳—电化学检测法(CE-ED)测定和比较了野生荠菜和养殖荠菜中酪胺、L-精氨酸、蔗糖、D-山梨醇和D-甘露醇等五种营养成分的含量,考察了运行液酸度和浓度、分离电压、氧化电位和进样时间等实验参数对分离、检测的影响。在最佳实验条件下,以直径300μm的铜圆盘电极为工作电极,检测电位为+0.70 V(vs.SCE),在60 mmol/L的硼砂缓冲溶液(pH=9.2)中,五组分在18 min内可实现基线分离。五组分峰电流与其浓度3个数量级范围内呈良好线性关系,最低检测限范围为1.23×10-7~7.50×10-7g/mL。该法应用于实际样品的分析,结果令人满意。第三章不同季节的四季青叶中活性成分含量的毛细管电泳—电化学分离检测采用毛细管电泳—电化学检测法分离检测了四个季度的四季青叶中的山柰酚、原儿茶醛、龙胆酸、对羟基苯甲酸、槲皮素、咖啡酸和原儿茶酸七种活性成分。实际样品分别采集于2月、5月、8月、11月的同一棵树。对比讨论了这七种活性成分随季节含量的变化。考察并优化了分离和检测的条件,在最佳实验条件下,七种组分可以很好地分离,被测物浓度与峰电流在2~3个数量级范围内呈良好的线性关系,检测限为0.75×10-7~3.46×10-7 g/mL。该方法已成功应用于实际样品的检测,结果令人满意。第四章小型化毛细管电泳—电化学检测法测定猪尿和猪饲料中的β-兴奋剂采用小型化毛细管电泳—电化学检测技术测定了猪尿和猪饲料中的克伦特罗(clenbuterol,俗称瘦肉精)及其替代品莱克多巴胺(ractopamine)和沙丁胺醇(salbutamol)。考察了工作电极的氧化电位、运行缓冲液的酸度和浓度、分离电压和进样时间等因素对分离和检测的影响。以直径300μm的碳圆盘电极为工作电极,检测电极电位为+0.95 V(vs.SCE),在100 mmol/L的硼酸盐(pH=9.15)运行缓冲液中,上述3种组分在7 min内实现了较好的分离。被测物浓度与峰电流3个数量级范围内呈良好的线性关系,检测限为1.20×10-7~2.06×10-7 g/mL。该方法简单可靠,已成功应用于猪尿和猪饲料样品中3种β-兴奋剂的测定,是一种有效的食品安全分析检测方法。
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