实验目的：　　BCR/ABL融合基因是由t(9;22)(q34; q11.2)易位产生，95％以上的CML患者有BCR/ABL融合基因存在，且其它血液肿瘤也有BCR/ABL融合基因存在，并随着靶向治疗药物的出现，检测BCR/ABL融合基因，对于血液肿瘤的诊断，预后的判断以及治疗监测显得极其重要，本实验依据美国CLIA，FDA，CAP等发表的对FISH技术临床检测指南，验证其各参数，如特异性，敏感度，正常域值，异常参考范围等，建立FISH BCR/ABL探针的标准验证方法程序，确保在常规的临床检测中的质量，以建立荧光原位杂交临床检测技术平台，评价间期FISH在临床检测BCR/ABL融合基因应用价值，并与传统细胞遗传学，以及PCR技术联合检测，对其三种方法进行评价，初步探讨CML患者的遗传检测策略。　　实验方法：　　1.2008年10月，应用临床正常的血液和骨髓样本进行FISH技术应用熟练操作，规范实验最佳条件，选取5例男性正常标本中期细胞检测FISH探针的灵敏度和特异性，选取20例正常样本（骨髓捐献者），应用Vysis双色双融合BCR/ABL探针FISH检测，数值运用EXCEL软件中的BETAINV函数，建立BCR/ABL融合基因FISH检测的正常域值。　　2.应用BCR/ABL双色双融合探针间期FISH方法检测2008年10月至2010年4月份的147名CML和疑似CML患者的195份样本。　　3.选取来自6名患者的26份临床标本应用传统的细胞遗传学，RT-PCR，以及FISH技术进行联合检测。　　实验结果：　　1.5份正常男性样本，验证不同批号的雅培分子BCR/ABL双色双融合探针特异性和敏感度分别为100％和98.4％，20例正常骨髓供者样本，验证各假阳性信号模式的CUT OFF值，其中两种主要假阳性信号模式CUT OFF值为1G1R1F9.11％;1G1R2F0.78％。　　2.195份临床诊断为CML或疑似CML的骨髓或外周血标本，以第1部分实验验证为评分标准，195例样本中129例样本检测为阳性，占66.1％，其中典型的阳性信号模式1G1R2F，样本92例，占阳性比例71.3％，非典型阳性信号模式37例，占28.7％，与有类似文献报道接近，检测出的各非典型的信号模式有1G1R1F、2G2R1F、1G2F、2G1R1F、1G2R1F、2G3R1F，1G1R3F。　　3.对来自6名确诊CML患者格列卫或骨髓移植治疗前后的26份骨髓样本用三种方法进行了检测结果见表6　　实验结论：　　1.FISH技术方法验证一般分为四个步骤，A.熟悉实验操作;B.前期验证实验包括内容有组织类型、信号模式解释、分析的细胞数和方法的敏感度、每一个信号模式的CUT OFF值;C.临床评价其内容包括首先是对前期验证实验建立的CUT OFF值进行评估;通过检测异常样本建立异常参考范围;解释各信号模式与金标准相关性;编写标准操作手册;实验的灵敏度或特异性;D.精密度评价。总之，验证要求遵从标准规则，因此，在其使用在临床实验之前，验证该实验符合性，安全性，准确性这一系列的程序是很重要的。　　2.间期FISH技术可以明显提高染色体异常的检出率及准确率，且其方法稳定。可以检测出所有形式的Ph染色体，对于一些次要断裂点形成BCR/ABL转录本RT-PCR无法检测到，间期双色双融合FISH可以检测出，FISH可应用于CML异基因造血干细胞移植后MRD的监测，以及伊马替尼治疗的疗效观察。其操作简易快速，灵敏度高，且骨髓或外周血均可采用。动态监测能及时发现扩大的白血病细胞克隆。是一种很有价值确诊，预后判断以及疗效观察有效手段。　　3.本研究中最适用在本中心开展且稳定的是FISH技术，其余两种方法稳定性，灵敏度，标本运输送检的流程上均需要进一步提高，而且本研究指出FISH检测与RT-PCR有很好的相关性，因此在本中心临床标本检测中，不管患者是处在疾病的何种时期，建议均需应用FISH技术检测BCR/ABL融合状态。在三种技术方法均正确稳定可靠的情况下可采用表7对CML患者进行遗传检测的策略。