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背景与目的 深静脉血栓形成（deep vein thrombosis，DVT）是指血液在深静脉内非正常的凝结，好发于下肢。血栓形成部位的栓子脱落以后随血液循环入肺，可导致肺栓塞（pulmonary embolism，PE），严重威胁患者的生命。深静脉血栓形成后综合征（post-thrombotic syndrome，PTS）是DVT患者最常见的长期并发症，严重影响患者的生活质量。静脉造影是诊断下肢DVT的金标准，准确性高，但是属于有创检查，而且部分病人对造影剂过敏。D-二聚体（D-dimer）在临床上广泛用于DVT的排除诊断，敏感性高，但是特异性低。P-选择素（P-selectin）在诊断下肢DVT时，具有较高的特异性。但是不同实验室之间，P-选择素尚无统一的检测方法和临界值。因此，仍需进一步探索新的诊断DVT的分子标志物。 循环miRNA在多种疾病的进展、诊断及预后等方面具有重要价值。研究证实miRNA-320b在静脉血栓性疾病中存在差异表达，但是在急性下肢DVT中的具体表达情况尚不清楚。因此，本课题分析miRNA-320b在急性下肢DVT、PTS和健康对照人群中的表达，并结合D-二聚体和P-选择素分析它们的诊断价值，以期为DVT的诊断提供更多的信息。 方法 1. 研究对象: 分别收集急性下肢 DVT 患者和 PTS 患者的血浆标本，作为DVT组和PTS组。同时期内收集与患者年龄、性别相匹配的体检者血浆标本，作为对照组。 2. 标本的收集与保存: 于入院后第二天早晨抽取DVT组、PTS组及对照组空腹外周血标本。离心分离血浆后备用。 3. 血浆 miRNA 相对表达量检测：采用 qRT-PCR 方法检测各血浆标本中miRNA-320b及内参基因miRNA-16的相对表达量。 4. D-二聚体水平的检测：D-二聚体浓度采用胶乳增强免疫比浊法测定。 5. P-选择素水平的检测：P-选择素的水平运用ELISA方法测定。 6. miRNA-320b靶基因预测：应用靶基因预测软件预测miRNA-320b可能调控的靶基因，并对预测的靶基因进行GO分析和KEGG通路富集分析。 7.统计学分析：应用SPSS 21.0统计软件进行统计学分析。正态定量指标采用均数±标准差表示，非正态定量指标采用中位数和四分位数间距表示；定性指标采用频数或百分比表示。三组定量资料之间的比较采用单因素方差分析（one-way ANOVA），定性资料采用卡方检验。相关性分析采用Spearman相关。绘制受试者工作特征（receiveroperator characteristic，ROC）曲线并计算曲线下面积（area under the curve，AUC）、敏感性和特异性，用来评估指标的诊断价值。所有分析均采用双侧检验，P＜0.05时认为差异具有统计学意义。 结果 1. miRNA-320b在急性下肢DVT患者血浆中的相对表达量显著高于对照组，差异具有统计学意义（P＜0.001），变化倍数是1.79倍。miRNA-320b在PTS患者血浆中的相对表达量与对照组相比差异无统计学意义（P=0.091）。 2. 与对照组相比，D-二聚体浓度在急性下肢DVT患者血浆中显著升高，差异具有统计学意义（P＜0.001）。而在PTS组中，D-二聚体浓度与对照组的差异无统计学意义（P=0.139）。 3. 与对照组相比，P-选择素浓度在急性下肢DVT患者血浆中显著升高，差异具有统计学意义（P＜0.001）。而在PTS组中，P-选择素浓度与对照组的差异无统计学意义（P=0.118）。 4. 在急性下肢DVT患者血浆中，miRNA-320b相对表达量与D-二聚体水平呈正相关（r=0.358，P= 0.001）；miRNA-320b相对表达量与P-选择素水平之间的相关性无统计学意义（r =-0.072，P= 0.524）。 5. ROC分析结果显示，血浆miRNA-320b、D-二聚体和P-选择素诊断急性下肢DVT的AUC分别为0.787（95% CI：0.710-0.864）、0.882（95% CI：0.821-0.943）和0.825（95% CI：0.754-0.895）。miRNA-320b与D-二聚体联合诊断的AUC为0.886（95% CI：0.828-0.944）；miRNA-320b与P-选择素联合诊断的AUC为0.904（95% CI：0.853-0.954）；P-选择素与D-二聚体联合诊断的AUC为0.935（95% CI：0.893-0.978）；miRNA-320b、D-二聚体和P-选择素联合诊断的AUC为0.953（95% CI：0.920-0.986）。 6. 生物信息学分析结果显示，miRNA-320b的预测靶基因的功能包括血管生成、血管发育和血管形态等生物学过程；富集通路包括PI3K-Akt信号通路、TGF-β信号通路以及细胞因子-细胞因子受体相互作用等。 结论 1. miRNA-320b在急性下肢DVT患者血浆中的相对表达量显著升高，可能成为诊断急性下肢DVT潜在的生物标志物。 2. D-二聚体和P-选择素水平在急性下肢DVT患者血浆中显著升高，而且血浆miRNA-320b的相对表达量与D-二聚体水平呈正相关。 3. miRNA-320b联合D-二聚体、P-选择素可提高急性下肢DVT诊断的准确性，有助于DVT的早期诊断。