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背景与目的 深静脉血栓形成(deep vein thrombosis,DVT)是指血液在深静脉内非正常的凝结,好发于下肢。血栓形成部位的栓子脱落以后随血液循环入肺,可导致肺栓塞(pulmonary embolism,PE),严重威胁患者的生命。深静脉血栓形成后综合征(post-thrombotic syndrome,PTS)是DVT患者最常见的长期并发症,严重影响患者的生活质量。静脉造影是诊断下肢DVT的金标准,准确性高,但是属于有创检查,而且部分病人对造影剂过敏。D-二聚体(D-dimer)在临床上广泛用于DVT的排除诊断,敏感性高,但是特异性低。P-选择素(P-selectin)在诊断下肢DVT时,具有较高的特异性。但是不同实验室之间,P-选择素尚无统一的检测方法和临界值。因此,仍需进一步探索新的诊断DVT的分子标志物。 循环miRNA在多种疾病的进展、诊断及预后等方面具有重要价值。研究证实miRNA-320b在静脉血栓性疾病中存在差异表达,但是在急性下肢DVT中的具体表达情况尚不清楚。因此,本课题分析miRNA-320b在急性下肢DVT、PTS和健康对照人群中的表达,并结合D-二聚体和P-选择素分析它们的诊断价值,以期为DVT的诊断提供更多的信息。 方法 1. 研究对象: 分别收集急性下肢 DVT 患者和 PTS 患者的血浆标本,作为DVT组和PTS组。同时期内收集与患者年龄、性别相匹配的体检者血浆标本,作为对照组。 2. 标本的收集与保存: 于入院后第二天早晨抽取DVT组、PTS组及对照组空腹外周血标本。离心分离血浆后备用。 3. 血浆 miRNA 相对表达量检测:采用 qRT-PCR 方法检测各血浆标本中miRNA-320b及内参基因miRNA-16的相对表达量。 4. D-二聚体水平的检测:D-二聚体浓度采用胶乳增强免疫比浊法测定。 5. P-选择素水平的检测:P-选择素的水平运用ELISA方法测定。 6. miRNA-320b靶基因预测:应用靶基因预测软件预测miRNA-320b可能调控的靶基因,并对预测的靶基因进行GO分析和KEGG通路富集分析。 7.统计学分析:应用SPSS 21.0统计软件进行统计学分析。正态定量指标采用均数±标准差表示,非正态定量指标采用中位数和四分位数间距表示;定性指标采用频数或百分比表示。三组定量资料之间的比较采用单因素方差分析(one-way ANOVA),定性资料采用卡方检验。相关性分析采用Spearman相关。绘制受试者工作特征(receiveroperator characteristic,ROC)曲线并计算曲线下面积(area under the curve,AUC)、敏感性和特异性,用来评估指标的诊断价值。所有分析均采用双侧检验,P<0.05时认为差异具有统计学意义。 结果 1. miRNA-320b在急性下肢DVT患者血浆中的相对表达量显著高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.001),变化倍数是1.79倍。miRNA-320b在PTS患者血浆中的相对表达量与对照组相比差异无统计学意义(P=0.091)。 2. 与对照组相比,D-二聚体浓度在急性下肢DVT患者血浆中显著升高,差异具有统计学意义(P<0.001)。而在PTS组中,D-二聚体浓度与对照组的差异无统计学意义(P=0.139)。 3. 与对照组相比,P-选择素浓度在急性下肢DVT患者血浆中显著升高,差异具有统计学意义(P<0.001)。而在PTS组中,P-选择素浓度与对照组的差异无统计学意义(P=0.118)。 4. 在急性下肢DVT患者血浆中,miRNA-320b相对表达量与D-二聚体水平呈正相关(r=0.358,P= 0.001);miRNA-320b相对表达量与P-选择素水平之间的相关性无统计学意义(r =-0.072,P= 0.524)。 5. ROC分析结果显示,血浆miRNA-320b、D-二聚体和P-选择素诊断急性下肢DVT的AUC分别为0.787(95% CI:0.710-0.864)、0.882(95% CI:0.821-0.943)和0.825(95% CI:0.754-0.895)。miRNA-320b与D-二聚体联合诊断的AUC为0.886(95% CI:0.828-0.944);miRNA-320b与P-选择素联合诊断的AUC为0.904(95% CI:0.853-0.954);P-选择素与D-二聚体联合诊断的AUC为0.935(95% CI:0.893-0.978);miRNA-320b、D-二聚体和P-选择素联合诊断的AUC为0.953(95% CI:0.920-0.986)。 6. 生物信息学分析结果显示,miRNA-320b的预测靶基因的功能包括血管生成、血管发育和血管形态等生物学过程;富集通路包括PI3K-Akt信号通路、TGF-β信号通路以及细胞因子-细胞因子受体相互作用等。 结论 1. miRNA-320b在急性下肢DVT患者血浆中的相对表达量显著升高,可能成为诊断急性下肢DVT潜在的生物标志物。 2. D-二聚体和P-选择素水平在急性下肢DVT患者血浆中显著升高,而且血浆miRNA-320b的相对表达量与D-二聚体水平呈正相关。 3. miRNA-320b联合D-二聚体、P-选择素可提高急性下肢DVT诊断的准确性,有助于DVT的早期诊断。