【摘 要】
：
目的:通过建立大鼠脊髓损伤模型,研究骨化三醇在脊髓损伤中的潜在神经保护作用,并确定其对于Nrf2核转位及氧化应激相关因子NOX2的调控作用,分析以上指标是否参与了大鼠脊髓损伤后的运动功能恢复。方法:使用96只SPF级成年雄性SD大鼠随机分成四组（每组24只）:假手术组、脊髓损伤组（模型组）、2ug/kg骨化三醇治疗组（治疗组）、30mg/kg自噬抑制剂（3-MA）干预组（自噬抑制组）。使用电动脊髓
论文部分内容阅读
目的:通过建立大鼠脊髓损伤模型,研究骨化三醇在脊髓损伤中的潜在神经保护作用,并确定其对于Nrf2核转位及氧化应激相关因子NOX2的调控作用,分析以上指标是否参与了大鼠脊髓损伤后的运动功能恢复。方法:使用96只SPF级成年雄性SD大鼠随机分成四组（每组24只）:假手术组、脊髓损伤组（模型组）、2ug/kg骨化三醇治疗组（治疗组）、30mg/kg自噬抑制剂（3-MA）干预组（自噬抑制组）。使用电动脊髓损伤撞击仪（撞击头尺寸2.5mm;撞击力度200千达因;撞击深度4mm;撞击压迫时间1s）对SD大鼠进行脊髓损伤模型的制作,假手术组只进行椎板切除而不撞击脊髓,其余组都进行撞击脊髓的处理。使用撞击仪撞击的各组大鼠,见到双下肢扑动即为造模成功,造模成功后立即注射相关液体。治疗组腹腔注射2ug/kg骨化三醇溶液,自噬抑制组腹腔注射2ug/kg骨化三醇溶液及30mg/kg3-MA溶液,模型组和假手术组注射等体积生理盐水,2次/天。在造模后相应的时间节点,使用心脏空气栓塞的方法处死各组大鼠。取各组大鼠相应节段脊髓,分别制作石蜡切片、冰冻切片,并提取组织蛋白。使用BBB评分观察造模后的大鼠运动功能恢复情况,使用苏木精-伊红（HE）染色观察不同分组同一脊髓平面组织剩余情况,使用尼氏染色检测不同分组中神经元的存活数量,使用免疫组织化学染色检测脊髓组织中Bcl2和Bax的阳性表达情况,使用Western Blot检测组织中Neu N、p62、LC3B、Keap1、Nrf2、NOX2、Bcl2和Bax的蛋白表达,使用双重免疫荧光染色检测Nrf2在神经元中的核移位情况,使用免疫荧光染色检测NOX2的表达情况。使用Image J软件处理HE染色图片、尼氏染色图片、免疫组化图片、Western Blot图片,定量分析它们表达量之间的关系。结果:行为学评分结果显示,治疗组大鼠在脊髓损伤后第7和14天可在一定程度上改善运动功能障碍（P<0.001）。在组织学方面,HE染色结果显示,与模型组相比,治疗组大鼠的脊髓结构得到恢复,神经元变性及白质的髓鞘改变程度减弱,残余脊髓组织百分比显著高于模型组（P<0.001）。与治疗组相比,自噬抑制组大鼠脊髓组织中脊髓结构受损严重（P<0.001）。尼氏染色结果显示,与模型组相比,治疗组大鼠的脊髓组织中存活神经元的数量增加（P<0.001）。与治疗组相比,自噬抑制组中存活神经元的数量减少（P<0.001）。Western blot对神经元标记物（Neu N）检测结果显示,与假手术组相比,模型组蛋白表达减低（P<0.01）,治疗组蛋白表达较模型组升高（P<0.05）,自噬抑制组蛋白表达较治疗组减低（P<0.01）。Western blot对自噬相关蛋白p62、LC3BⅡ的检测结果显示,与假手术组相比,模型组p62蛋白表达升高（P<0.05）,治疗组蛋白表达较模型组降低（P<0.01）;与模型组相比,治疗组LC3BⅡ蛋白表达升高（P<0.001）,自噬抑制组蛋白表达较治疗组降低（P<0.001）。Western blot对上游蛋白Keap1的检测结果显示,与模型组相比,治疗组蛋白表达降低（P<0.001）,自噬抑制组蛋白表达较治疗组升高（P<0.01）;双免疫荧光分析Nrf2与Neu N共定位情况,在治疗组,有更多神经元发生了核移位。Western blot检测脊髓组织核蛋白中Nrf2的表达情况。与其他各组相比,在治疗组中,Nrf2蛋白表达显著增加（P<0.001）。免疫荧光分析氧化应激相关蛋白NOX2的表达情况,与模型组相比,治疗组NOX2的荧光强度减弱,Western blot也得到了相同的结果（P<0.001）。Western blot对凋亡相关蛋白Bcl2及Bax的检测显示,与假手术组相比,模型组Bcl2蛋白表达降低（P<0.05）,治疗组的蛋白表达较模型组升高（P<0.001）,自噬抑制组的蛋白表达较治疗组降低（P<0.001）;与假手术组相比,模型组Bax蛋白表达升高（P<0.001）,治疗组的蛋白表达较模型组降低（P<0.001）,自噬抑制组蛋白表达较治疗组升高（P<0.05）;免疫组织化学染色的结果与Western blot结果相一致（P<0.001）。结论:（1）骨化三醇能减弱大鼠脊髓损伤后脊髓组织的病理损害,从而发挥神经保护作用。（2）骨化三醇可以通过激活自噬促进大鼠脊髓损伤后Nrf2在神经元中的核移位。（3）骨化三醇可以通过激活自噬降低大鼠脊髓损伤后氧化应激相关因子NOX2的表达,抑制大鼠脊髓损伤后的氧化应激过程,从而发挥抗氧化保护作用。
其他文献
目的:DNAX活化蛋白12（DNAX-activating protein 12 k D,DAP12）是一种信号转导衔接蛋白,表达于中枢神经系统的小胶质细胞、少突胶质细胞等。DAP12的缺失可引起中枢神经系统中的少突胶质细胞分化受损、突触变性及髓鞘减少,然而DAP12是否表达于周围神经的施万细胞中目前尚不明确。本研究旨在明确DAP12在施万细胞上的表达以及探究DAP12对周围神经的作用。方法:我们
目的:研究表明抗苗勒管激素（Anti-Mullerian Hormone,AMH）水平可以评估窦卵泡数及预测活产率。但很少有研究分析AMH与行体外受精-胚胎移植（in vitro fertilization and embryo transfer,IVF-ET）后患者的早期妊娠丢失率的关系,来进一步探究AMH与胚胎质量的关系。本研究将通过分析IVF-ET患者AMH水平与早期妊娠丢失之间的关系来判断
目的:在很多疾病的研究中,估算肾小球滤过率（e GFR）与认知功能之间的相关性存在争议,而帕金森病（PD）患者中e GFR与认知功能之间的相关性研究却很少。因此,本研究的目的是研究在校正其他协变量后,帕金森病患者的e GFR与认知功能评分是否独立相关。方法:本研究是一项横断面研究。纳入自2017年1月至2019年12月就诊于济宁医学院附属医院神经内科的中国帕金森病患者,共135名。目标自变量和因变
目的:研究补体B因子、D因子在糖尿病肾病（Diabetic nephropathy,DN）中的表达及意义。方法:纳入2型糖尿病患者227例,健康对照者106例,根据2型糖尿病诊断和分型标准,分为糖尿病组（227例）和正常对照组（106例）,根据糖尿病肾病诊断标准,将糖尿病组患者分为糖尿病肾病组（112例）和糖尿病非肾病组（115例）。收集各组病例信息。检测各组病例血浆补体B因子（Complemen
目的:研究膝关节骨性关节炎患者关节软骨中Lnc RNA HOTAIR含量与正常人的相比表达是否存在差异,并探究HOTAIR的表达在IL-1β介导的软骨细胞凋亡及细胞外基质降解的作用。方法:取因膝骨性关炎（OA）于我院行全膝关节置换术（TKA）患者的膝关节内侧髁软骨作为实验组（OA组）,取无关节炎患者的关节软骨作为对照组（Nor组）,通过RT-PCR分析两组关节软骨中lnc RNA HOTAIR的表
目的:近几十年来,我国糖尿病患病率逐年攀升,糖尿病病人的生存时间逐年延长,多年的糖尿病病史容易累及心、脑、肾等各重要脏器。由于糖尿病肾病的隐匿性,许多糖尿病肾病的病人发病时已经进入糖尿病肾病的晚期到糖尿病肾病尿毒症期。糖尿病肾病尿毒症期多数需要长期血液透析维持性治疗。为了进一步延长糖尿病肾病尿毒症期患者长期生存率,控制稳定的血糖浓度,是我们临床医生的主要责任。除了管理好病人进行药物控制好血糖浓度,
抗苗勒氏激素（anti-Müllerianhormone,AMH）是TGF-β家族的一种二聚糖蛋白成员。在女性中,AMH主要来源于窦前和早期窦前卵泡,近年来发现可以提示卵泡池的大小。虽然AMH水平在许多情况下被用来评估卵巢储备,但它最常用的作用是评估在辅助生殖中卵巢刺激的反应性。AMH在生殖期由卵巢颗粒细胞表达,并通过抑制FSH过度的卵泡募集来限制初级卵泡的形成。在这种情况下,AMH可以预测回收的
目的:对比超声评估方法与膝骨关节炎常用的临床评估（VAS评分、WOMAC评分）、影像学评估（DR、MRI）之间的相关性,探讨超声检查在膝骨关节炎病人评估中的价值及无创检查对临床的帮助。方法:选取2019年11月～2020年12月于山东省济宁市济宁医学院附属医院骨关节科门诊出现膝关节疼痛、肿胀、活动受限等症状,且排除关节外伤、手术史的膝骨关节炎患者作为本研究中的对象[n=120例,女67例,男53例
目的:探讨尺骨斜形截骨治疗尺骨撞击综合征的早期疗效,同时分析尺骨撞击综合征患者可能引起腕骨发生囊性变的原因及尺骨斜形截骨术后腕骨囊性变的变化结局。方法:回顾性分析2018年7月至2019年12月济宁市第一人民医院手足外科总院病区及东院病区的22例尺骨撞击综合征,随访12个月以上,通过比较其术前和末次随访时尺骨变异情况、目测类比评分以及改良的Mayo腕关节评分,对该术式的早期临床效果进行评价。从性别
目的:肉芽肿性乳腺炎（granulomatous mastitis,GM）是一种相对少见的乳腺良性慢性炎症性疾病,目前GM的病因及发病机制尚不明确,治疗方案也多种多样,若治疗不当则病情迁延不愈,甚至有患者因此切除了整个乳房,给患者带来经济负担的同时也严重影响着患者的身心健康。因此,本研究的目的是比较分析糖皮质激素联合手术治疗肉芽肿性乳腺炎的临床疗效及治疗后乳房外观的情况,希望对治疗GM提供指导。方