【摘 要】
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皮肤作为人体最大的器官,具有屏障、免疫、体温调节和代谢功能。其厚度包括表皮厚度和真皮厚度,主要取决于真皮厚度,而真皮主要由富含皮肤成纤维细胞分泌的致密I型胶原蛋白的细胞外基质组成。猪皮在结构上与人类皮肤更为相似,常被用于作为人类皮肤研究的替代品。成华猪作为四川地方品种猪之一,在本课题组的前期研究中发现其皮肤厚度高达8.8mm,极具品种特色,故深入了解成华猪独特皮厚的分子机制具有一定意义。micro
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皮肤作为人体最大的器官,具有屏障、免疫、体温调节和代谢功能。其厚度包括表皮厚度和真皮厚度,主要取决于真皮厚度,而真皮主要由富含皮肤成纤维细胞分泌的致密I型胶原蛋白的细胞外基质组成。猪皮在结构上与人类皮肤更为相似,常被用于作为人类皮肤研究的替代品。成华猪作为四川地方品种猪之一,在本课题组的前期研究中发现其皮肤厚度高达8.8mm,极具品种特色,故深入了解成华猪独特皮厚的分子机制具有一定意义。micro RNA(miRNA)是一类长度约为22nt且物种间高度保守的非编码单链RNA分子,在哺乳动物的发育过程中发挥着重要的作用,参与了许多重要组织的发育调控。本研究选取在成华猪皮肤成纤维细胞和大白猪皮肤成纤维细胞中,上调表达差异最大的miRNA218(miR-218)作为研究对象,使用成华猪原代皮肤成纤维细胞及C57小鼠为模型,并运用q PCR、Ed U、双荧光素酶报告基因系统、H&E染色、WB等方法,探究了miR-218对皮肤成纤维细胞增殖和I型胶原蛋白合成的影响。主要得到了以下结果:1.体外细胞培养试验中,过表达miR-218可以促进皮肤成纤维细胞的增殖、迁移,并增强了I型胶原蛋白的合成,同时通过三维胶原蛋白凝胶实验,发现过表达miR-218能促进皮肤成纤维细胞胶原收缩。小鼠体内过表达miR-218可以增加小鼠的皮肤真皮层厚度和其皮肤I型胶原蛋白的含量。2.抑制miR-218表达则减弱了皮肤成纤维细胞的增殖、迁移,减少了I型胶原蛋白的合成。在三维胶原蛋白凝胶实验中,抑制miR-218表达削弱了皮肤成纤维细胞的胶原收缩。3.TGIF2是miR-218的靶基因,其过表达能抑制皮肤成纤维细胞的增殖、迁移,减少I型胶原蛋白的合成。抑制TGIF2的表达,可以增强皮肤成纤维细胞的增殖、迁移,增加I型胶原蛋白的合成。4.miR-218-TGIF2调控轴能激活TGFβ1-SMAD2/3信号通路,调控I型胶原蛋白合成。
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