【摘 要】
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柑橘以其丰富的营养和经济价值,在世界各地广为栽培,并受到广大人民的欢迎。柑橘从播种到首次开花需要经历较长的童年阶段,一般6-8年,这严重阻碍了柑橘的育种进程。FD属于bZIP转录因子家族,可以与“成花素”（FT）形成复合物,该复合物可以通过促进下游开花相关基因的表达从而促进植物开花。在植物中,b HLH类转录因子参与多种生理过程,例如生理代谢、生长发育以及逆境响应等。课题组前期利用CiFD启动子进
【基金项目】
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国家重大研发计划（2018YFD1000104）； 国家自然科学基金（319702356,32072521 和 31872045）；
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柑橘以其丰富的营养和经济价值,在世界各地广为栽培,并受到广大人民的欢迎。柑橘从播种到首次开花需要经历较长的童年阶段,一般6-8年,这严重阻碍了柑橘的育种进程。FD属于bZIP转录因子家族,可以与“成花素”（FT）形成复合物,该复合物可以通过促进下游开花相关基因的表达从而促进植物开花。在植物中,b HLH类转录因子参与多种生理过程,例如生理代谢、生长发育以及逆境响应等。课题组前期利用CiFD启动子进行酵母单杂筛库,发现CibHLH96可以与CiFD互作。本研究以CibHLH96转基因烟草为研究材料,通过酵母单杂交实验、EMSA实验和LUC等实验验证CibHLH96与CiFD启动子的互作,进一步分析CibHLH96与CiFD的互作机制在干旱诱导柑橘开花途径中的调控作用。主要研究结果如下:1.对CibHLH96进行保守结构域分析,发现CibHLH96蛋白含有b HLH蛋白所具有的典型的（b HLH）结构域,位于第126-196位氨基酸。此外,系统进化分析表明CibHLH96在柑橘本物种中同源性最高,即CibHLH96在柑橘物种进化中高度保守。2.转基因烟草开花时间统计发现,相对于野生型,CibHLH96超表达烟草开花时间提前,叶片数明显减少。qRT-PCR分析CibHLH96超表达烟草中开花相关基因的表达量,发现Nt FD、Nt AP1、Nt LFY和NtFT的表达量都显著高于野生型。3.对成年金柑进行干旱处理后可诱导成花。CiFD启动子在甘露醇处理下GUS染色以及GUS活性分析表明CiFD启动子活性受干旱诱导。进一步q RT-PCR分析发现CiFD基因两个不同类型的剪切本CiFDα和CiFDβ受干旱诱导,同样的,CibHLH96的表达水平随干旱程度的加深而升呈现上升趋势。4.通过酵母单杂交实验和EMSA实验证明CibHLH96可以与CiFD启动子互作。同样,通过EMSA实验证明CiFDα和CiFDβ都可以与下游CiAP1的启动子结合。此外,通过LUC实验证明CiFDβ可以促进下游CiAP1的表达。
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