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研究背景：
p53功能障碍是导致肿瘤发生的重要原因。p53基因突变是p53功能失活的主要方式，在所有癌症病例中约有一半发生p53基因突变。在没有发生p53基因突变的肿瘤细胞中，p53正调控因子的表达下调或/和负调控因子的过度激活也可以导致野生型p53功能失活。本研究室前期发现CCDC106可以促进p53蛋白的降解，而ZCCHC10可以抑制p53蛋白的降解。本论文进一步对CCDC106和ZCCHC10在癌症组织中的表达及其对癌症发生发展的作用进行研究。
研究方法：
利用荧光定量PCR方法和Westernblot实验分别检测基因的mRNA和蛋白质表达量。采用慢病毒系统构建基因过表达和干扰的稳定细胞株。采用免疫共沉淀法和GST-pulldown检测蛋白相互作用。核质分离和免疫荧光染色检测蛋白亚细胞定位。磷酸化抗体检测蛋白质的磷酸化。MTT法测定细胞活力，流式细胞仪检测细胞周期和凋亡，平板集落形成实验检测细胞增殖能力，伤口愈合实验检测细胞迁移能力，TransWell侵袭实验检测细胞侵袭能力。采用皮下移植瘤小鼠模型研究CCDC106或ZCCHC10对体内肿瘤生长的影响。采用尾静脉注射小鼠模型研究ZCCHC10对肿瘤转移的影响。
研究结果：
一、CCDC106在乳腺癌和宫颈癌中的作用及分子机制
1、在含有野生型p53(wtp53)宫颈癌HeLa细胞和乳腺癌MCF7细胞中干扰CCDC106可以增强p53蛋白的稳定，促进细胞凋亡，抑制细胞存活、集落形成、迁移和侵袭。
2、在含有wtp53的正常乳腺上皮HBL100和宫颈癌SiHa细胞中过表达CCDC106则促进p53蛋白的降解，抑制细胞凋亡，促进细胞存活、集落形成、迁移和侵袭。
3、CCDC106对p53突变的宫颈癌和乳腺癌细胞(C33A和MDA-MB-231)的细胞存活、集落形成、迁移和侵袭没有显著影响。
4、本研究室以前通过体外磷酸化实验发现CCDC106的Ser-130和Ser-147位点是蛋白激酶CK2的磷酸化位点。本文进一步证实在细胞中CK2确实可以在Ser-130和Ser-147这两个位点磷酸化CCDC106。将CCDC106的Ser-130突变为Ala，则CCDC106不能与p53蛋白相互作用；而Ser-147突变为Ala，则CCDC106不能定位于细胞核中，说明Ser-130和Ser-147位点磷酸化分别是CCDC106与p53相互作用和核定位磷酸化所必需的。
5、将CCDC106的Ser-130和Ser-147都突变为Ala，或用CK2抑制剂CX-4945处理细胞，可以抑制CCDC106的磷酸化和促癌能力。
6、在异种移植小鼠模型中，野生型CCDC106可以促进p53的降解和肿瘤生长，而突变型CCDC106则没有作用。
7、在含有wtp53的癌细胞系中干扰CCDC106基因的表达，可以增加细胞对CX-4945的敏感性。
二、ZCCHC10在肺癌中的作用及其分子机制
1、通过对54对肺癌组织和癌旁组织中的ZCCHC10的表达分析，发现在肺腺癌组织中的ZCCHC10的表达水平低于相应的癌旁非癌组织。对癌症公共数据库的分析发现，癌组织中ZCCHC10的mRNA表达水平与患者生存率正相关。
2、在含有wtp53的肺癌细胞中过表达ZCCHC10，显著抑制细胞的增殖、集落形成、迁移、侵袭和顺铂耐药，而在含有wtp53的正常肺细胞系Beas-2b中干扰ZCCCHC10则促进细胞的增殖、集落形成、迁移、侵袭和顺铂耐药。
3、ZCCHC10对p53缺失的细胞(H358)或p53突变的细胞(H1437)的集落形成、增殖、迁移和侵袭没有影响。
4、裸鼠皮下成瘤实验结果表明ZCCHC10过表达抑制肿瘤的生长，而裸鼠肿瘤转移模型实验结果表明ZCCHC10过表达抑制肿瘤的转移。
5、免疫共沉淀证明野生型ZCCHC10蛋白能和p53蛋白相互作用，而突变其CCHC结构域，则不能与p53相互作用，说明ZCCHC10通过其CCHC结构域与p53发生作用。
6、ZCCHC10抑制p53和MDM2之间的相互作用和MDM2介导的p53蛋白泛素化，从而增强p53蛋白的稳定性。
7、p53抑制剂pifithrin-α减轻ZCCHC10过表达时对p53通路、细胞周期、细胞凋亡和上皮间质转换的影响,而p53激活剂Nutlin3可以反转ZCCHC10干扰引起的影响，说明ZCCHC10通过p53发挥作用。
结论：
1、在乳腺癌和宫颈癌中，CCDC106通过促进p53蛋白的泛素化和降解，发挥促癌作用。
2、蛋白激酶CK2可以在Ser-130和Ser-147这两个位点磷酸化CCDC106，Ser-130和Ser-147位点的磷酸化分别是CCDC106与p53相互作用和核定位所必需的。
3、在肺癌中，ZCCHC10通过抑制MDM2对p53蛋白的泛素化，增强p53蛋白的稳定性，从而抑制肺癌的进展和顺铂耐药性。
p53功能障碍是导致肿瘤发生的重要原因。p53基因突变是p53功能失活的主要方式，在所有癌症病例中约有一半发生p53基因突变。在没有发生p53基因突变的肿瘤细胞中，p53正调控因子的表达下调或/和负调控因子的过度激活也可以导致野生型p53功能失活。本研究室前期发现CCDC106可以促进p53蛋白的降解，而ZCCHC10可以抑制p53蛋白的降解。本论文进一步对CCDC106和ZCCHC10在癌症组织中的表达及其对癌症发生发展的作用进行研究。
研究方法：
利用荧光定量PCR方法和Westernblot实验分别检测基因的mRNA和蛋白质表达量。采用慢病毒系统构建基因过表达和干扰的稳定细胞株。采用免疫共沉淀法和GST-pulldown检测蛋白相互作用。核质分离和免疫荧光染色检测蛋白亚细胞定位。磷酸化抗体检测蛋白质的磷酸化。MTT法测定细胞活力，流式细胞仪检测细胞周期和凋亡，平板集落形成实验检测细胞增殖能力，伤口愈合实验检测细胞迁移能力，TransWell侵袭实验检测细胞侵袭能力。采用皮下移植瘤小鼠模型研究CCDC106或ZCCHC10对体内肿瘤生长的影响。采用尾静脉注射小鼠模型研究ZCCHC10对肿瘤转移的影响。
研究结果：
一、CCDC106在乳腺癌和宫颈癌中的作用及分子机制
1、在含有野生型p53(wtp53)宫颈癌HeLa细胞和乳腺癌MCF7细胞中干扰CCDC106可以增强p53蛋白的稳定，促进细胞凋亡，抑制细胞存活、集落形成、迁移和侵袭。
2、在含有wtp53的正常乳腺上皮HBL100和宫颈癌SiHa细胞中过表达CCDC106则促进p53蛋白的降解，抑制细胞凋亡，促进细胞存活、集落形成、迁移和侵袭。
3、CCDC106对p53突变的宫颈癌和乳腺癌细胞(C33A和MDA-MB-231)的细胞存活、集落形成、迁移和侵袭没有显著影响。
4、本研究室以前通过体外磷酸化实验发现CCDC106的Ser-130和Ser-147位点是蛋白激酶CK2的磷酸化位点。本文进一步证实在细胞中CK2确实可以在Ser-130和Ser-147这两个位点磷酸化CCDC106。将CCDC106的Ser-130突变为Ala，则CCDC106不能与p53蛋白相互作用；而Ser-147突变为Ala，则CCDC106不能定位于细胞核中，说明Ser-130和Ser-147位点磷酸化分别是CCDC106与p53相互作用和核定位磷酸化所必需的。
5、将CCDC106的Ser-130和Ser-147都突变为Ala，或用CK2抑制剂CX-4945处理细胞，可以抑制CCDC106的磷酸化和促癌能力。
6、在异种移植小鼠模型中，野生型CCDC106可以促进p53的降解和肿瘤生长，而突变型CCDC106则没有作用。
7、在含有wtp53的癌细胞系中干扰CCDC106基因的表达，可以增加细胞对CX-4945的敏感性。
二、ZCCHC10在肺癌中的作用及其分子机制
1、通过对54对肺癌组织和癌旁组织中的ZCCHC10的表达分析，发现在肺腺癌组织中的ZCCHC10的表达水平低于相应的癌旁非癌组织。对癌症公共数据库的分析发现，癌组织中ZCCHC10的mRNA表达水平与患者生存率正相关。
2、在含有wtp53的肺癌细胞中过表达ZCCHC10，显著抑制细胞的增殖、集落形成、迁移、侵袭和顺铂耐药，而在含有wtp53的正常肺细胞系Beas-2b中干扰ZCCCHC10则促进细胞的增殖、集落形成、迁移、侵袭和顺铂耐药。
3、ZCCHC10对p53缺失的细胞(H358)或p53突变的细胞(H1437)的集落形成、增殖、迁移和侵袭没有影响。
4、裸鼠皮下成瘤实验结果表明ZCCHC10过表达抑制肿瘤的生长，而裸鼠肿瘤转移模型实验结果表明ZCCHC10过表达抑制肿瘤的转移。
5、免疫共沉淀证明野生型ZCCHC10蛋白能和p53蛋白相互作用，而突变其CCHC结构域，则不能与p53相互作用，说明ZCCHC10通过其CCHC结构域与p53发生作用。
6、ZCCHC10抑制p53和MDM2之间的相互作用和MDM2介导的p53蛋白泛素化，从而增强p53蛋白的稳定性。
7、p53抑制剂pifithrin-α减轻ZCCHC10过表达时对p53通路、细胞周期、细胞凋亡和上皮间质转换的影响,而p53激活剂Nutlin3可以反转ZCCHC10干扰引起的影响，说明ZCCHC10通过p53发挥作用。
结论：
1、在乳腺癌和宫颈癌中，CCDC106通过促进p53蛋白的泛素化和降解，发挥促癌作用。
2、蛋白激酶CK2可以在Ser-130和Ser-147这两个位点磷酸化CCDC106，Ser-130和Ser-147位点的磷酸化分别是CCDC106与p53相互作用和核定位所必需的。
3、在肺癌中，ZCCHC10通过抑制MDM2对p53蛋白的泛素化，增强p53蛋白的稳定性，从而抑制肺癌的进展和顺铂耐药性。