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目的:建立环氧基修饰的磁性微粒(简称“环氧磁粒”)为载体固定凝聚素的方法,利用该方法对多种生物学样品进行糖蛋白的分离纯化,并进行蛋白质组学的初步研究。方法:以环氧磁粒为载体固定小扁豆凝集素LCA及麦胚凝集素WGA,对二者固定化及分离提取糖蛋白的条件进行优化。研究α-甲基甘露糖苷及二价金属离子对于偶联反应的影响。对以健康人肝脏细胞Chang Liver总蛋白、肝癌细胞SMMC-7721总蛋白及健康人血清为样品,分离提取三种生物学样品中的糖蛋白。并对Chang Liver细胞糖蛋白及SMMC-7721细胞糖蛋白进行双向电泳,通过2DImageMaster分析软件对双向电泳凝胶进行背景消减,蛋白点识别及匹配。比较二者之间LCA结合糖蛋白表达的差异。结果:通过对LCA与环氧磁粒最适偶联pH、最适偶联时间、偶联温度及封闭等条件的优化,使凝集素与环氧磁粒的偶联效率达到90%。研究α-甲基甘露糖及二价金属离子对其分离纯化糖蛋白的影响,二者对于凝集素与环氧磁粒的偶联并无显著影响。确定0.1%SDS作为糖蛋白洗提缓冲液。利用该方法对健康人肝脏细胞Chang Liver总蛋白、肝癌细胞SMMC-7721总蛋白及健康人血清进行了糖蛋白的分离纯化,结合2D电泳技术及其图像分析,建立了健康人肝脏细胞ChangLiver和肝癌细胞SMMS-7721 LCA结合糖蛋白的差异表达谱,分别得到蛋白质点148±5和209±7个,匹配点数为127,匹配率为85.36%。与健康人肝细胞糖蛋白相比,匹配的蛋白点中肝癌细胞SMMC-7721糖蛋白有6个蛋白点表达明显上调,3个蛋白点表达发生明显下调,3个蛋白点没有表达,新出现了35个蛋白点。两块胶的蛋白点在位置上有较好的重复性,两块胶间蛋白质点在IEF方向上的偏差为(0.873±0.215)mm,在SDS-PAGE方向上的偏差为(1.025±0.125)mm。摸索WGA与环氧磁粒偶联条件,确定其在pH4条件下偶联效率可达85%,初步研究得到偶联时间以1h为最佳。利用固定化的WGA分离纯化健康人血清中唾液酸化糖蛋白,SDS-PAGE电泳显示WGA磁粒可在高丰度蛋白质干扰的情况下实现对低丰度蛋白质较好的分离效果。结论:以环氧基修饰的磁性微粒为固定化载体可实现多种凝集素的固定化修饰。在不同的条件下可实现不同凝集素的高效偶联。利用环氧磁粒固定化凝集素分离纯化复杂样品中的糖蛋白,可应用于蛋白质组学研究。结合双向电泳技术首次建立了健康人肝脏细胞Chang Liver和肝癌细胞SMMS-7721 LCA结合糖蛋白的差异表达谱。