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为了进一步提高猪精子冷冻解冻后的品质,本试验通过两因素交叉设计,以冷冻解冻后精子活率为评定标准,研究了常温保存液预处理对猪精液冷冻保存的影响,并研究了甘油平衡时间对常温保存液和冷冻基础液的影响;以冷冻解冻后精子活率、碘化丙啶(PI)染色活力、罗丹明123 染色线粒体活性、低渗膨胀测试(HOST)弯尾率、异硫氰酸荧光素连接的花生凝集素(FITC-PNA)和氯四环素(CTC)染色顶体完整率、获能处理前获能率、获能潜力等作为评定指标,研究了三种双糖(海藻糖、蔗糖、乳糖)添加和蛋黄低密度脂蛋白(LDL)完全替代蛋黄后对冻后猪精子品质的影响。结果表明: 1. 在两种甘油平衡方案中,三种冷冻基础液对冻后精子活率的影响都没有明显的差异(P>0.05, n=18);冻前用常温保存液预处理对冻后精子活率有极显著的影响(P<0.01, n=9=,而且常温保存液与冷冻基础液之间表现出极明显的配合效应(P<0.01, n=54)。2. 甘油平衡时间对三种冷冻液基础液没有明显的影响(P>0.05, n=18),但对BTS、Zorlesco、Schonow、葡-咖-丙四种常温保存液有显著的影响( P<0.05, n=9)。其中用BTS预处理精液时,适宜的甘油平衡时间为2~3h;而Zorlesco、Schonow、葡-咖-丙适宜的甘油平衡时间为5~10min。3. 添加双糖对冻后精子活率、活力有很大影响,处理间存在极显著的差异(P<0.01, n=39);三种双糖的替代量在50%和100%时冻后精子活率、活力均急剧下降;海藻糖和蔗糖的添加效果优于乳糖(P<0.05, n=39),最佳替代量为25%,其冻后精子活率可稳定在0.4(分别为40.67%、40.33%)。4. 就FITC-PNA 和CTC 染色获得的顶体完整率而言,处理间存在极显著的差异(FB8=152.896, FB7=291.393, P<0.01, n=39);海藻糖可显著提高冻后精子的顶体完整率(P<0.05, n=39),四个替代量顶体完整率分别为63.41%、64.41%、65.08%、66.47%,明显优于蔗糖、乳糖添加组和TCG对照组(分别为40.36%、38.29%、37.91%)。5. 海藻糖可明显降低冷冻过程造成的精子获能百分率(P<0.05, n=39),而蔗糖和乳糖则没这种能力,乳糖的替代量达到75%和100%时反而使冷冻解冻过程造成的精子获能率上升(分别为10.48%、11.15%,P<0.05, n=39)。6. 添加双糖可显著提高冻后精子的获能潜力(P<0.05, n=39),在替代量为25%时效果最佳,分别为38.25%、31.40%、27.37%。