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目的:
1.通过观察急性胰腺炎小鼠模型不同亚群的树突状细胞(Dendritic Cells,DCs):髓系树突状细胞、淋巴系树突状细胞数量及二者比例的变化,从免疫学角度探讨急性胰腺炎的发病机制;
2.探讨善宁、厚朴酚两种药物对急性胰腺炎的干预作用。
方法:
1.模型制备:连续7次腹腔注射雨蛙素制备急性胰腺炎模型,每次间隔1小时;
2.分组:90只雄性、6—8周BALB/C小鼠(BW18—20g)随机分为五组:生理盐水正常对照组,急性胰腺炎模型组,善宁治疗组,厚朴酚治疗组,上述两种药物联合治疗组。善宁于每次腹腔注射雨蛙素后30分钟皮下注射;厚朴酚于造模完成后即刻尾静脉注射方式给予;
3.观察指标:①血淀粉酶及胰腺病理:于首次雨蛙素腹腔注射后第12小时处死各组小鼠各6只,测定外周血淀粉酶含量;同时观察胰腺组织的大体病理、组织病理变化。②髓系树突状细胞(Myelouc DCs:MDCs)与淋巴系树突状细胞(Lymphoid DCs:LDCs)的数量及比例:于首次腹腔注射雨蛙素后第9h、12h及第24h分别处死上述各组小鼠各6只,摘除脾脏,密度离心法分离出脾脏淋巴细胞,同时应用抗CD11c、抗CD11b、抗CD8α三种单抗与淋巴细胞中树突状细胞表面抗原染色,应用流式细胞分析法分离出DCs(CD11c+),并测定两种不同亚群:MDC(CD11c+CD11b+CD8α—)、LDC(CD11c+CD8α+CD11b—)的比例。③外周血细胞因子的变化:应用微量样本多指标流式蛋白定量检测技术(简称CBA)测定外周血细胞因子:IL-10、IFN—γ水平;拟通过上述两种细胞因子来间接判定T辅助淋巴细胞1(T helper lymphocyte1:Th1)/T辅助淋巴细胞2(Thelper lymphocyte2:Th2)两种亚群在不同组不同时间点的比例的变化。
结果:
1.急性胰腺炎时,小鼠血淀粉酶(26113.00±1961.78IU/L)及胰腺病理评分(5.32±0.19)均较正常对照组升高明显(P<0.001);树突状细胞两种亚型比例MDC/LDC(1.712±0.372)较正常组有下降趋势,以9h时最为显著(P<0.05);外周血细胞因子IL-10/IFN—γ比例较正常对照组无显著差异(P>0.05);
2.善宁治疗作用:善宁干预组小鼠血淀粉酶(18248.83±1088.56IU/L)及胰腺病理改变(4.55±0.15)较模型组均有显著下降(P<0.001);MDC/LDC比例较模型组无显著差异(P>0.05);外周血细胞因子IL-10/IFN—γ比例在3个时间点较模型组均无显著差异(P>0.05);
3.厚朴酚干预作用:厚朴酚治疗组小鼠血淀粉酶(17324.00±1258.19IU/L)及胰腺病理改变(4.16±0.18)较模型组均有显著下降(P<0.001);MDC/LDC比例(4.69±0.53)较模型组有显著升高(P<0.001),以9h最为显著;外周血细胞因子IL-10/IFN—γ比例在3个时间点上较模型组均有显著升高(P<0.05),在12h时较善宁组(P<0.05)有显著升高;
4.联合组上述各项指标变化趋势同厚朴酚组:5对比善宁组,厚朴酚组MDC/LDC比例有显著升高(P<0.05);血细胞因子IL-10/IFN—γ比例较善宁组(3.56±0.36)亦有升高趋势,以12h(8.00±1.74)时最为显著(P<0.05)。
结论:
1.急性胰腺炎时,小鼠脾脏MDC/LDC比例下降,同时血细胞因子IL-10/IFN—γ比例亦呈下降趋势。通过上述DCs和细胞因子的变化,推测急性胰腺炎时小鼠Th0向Th1分化增加,向Th2分化减少,导致炎症反应、抗炎反应失衡;
2.应用厚朴酚以及厚朴酚、善宁联合治疗时会导致上述两种比例较模型组有显著升高,且两组间无显著差异;而上述变化在善宁组无体现,推测厚朴酚治疗胰腺炎的作用是通过调节树突状细胞不同亚型的分化、分泌不同的细胞因子,后者促进Th0向Th2分化,最终导致胰腺炎时抗炎作用强于炎症反应,从而减轻局部及全身炎症反应;而善宁则未表现出上述作用。