刚地弓形虫是一种重要的机会致病性原虫,呈世界性广泛分布,可感染所有温血哺乳动物及鸟类。正常人感染弓形虫通常表现为无症状的隐性感染,但孕早期妇女在感染弓形虫后,可能会导致流产、早产甚至死产,幸存者也常遗留严重的新生儿神经和视网膜病变。而当人类或其他宿主免疫力降低或缺乏时,弓形虫即可在体内大量繁殖并引起如弓形虫脑病之类的严重的临床症状甚至死亡。由于现阶段并没有有效的药物来治疗弓形虫病,因此对于抗弓形虫疫苗的研究是非常有前景的。目前,关于抗弓形虫疫苗目前有大量的研究,包括灭活疫苗,减毒活疫苗以及基因工程疫苗。但是,减毒活疫苗可能发生毒力返强,存在再感染的可能。而基于不同弓形虫抗原的基因工程疫苗因其抗弓形虫感染的安全有效而得到人们越来越多的关注。然而,许多研究显示基于不同弓形虫抗原的DNA疫苗虽被证实可引起保护性的Thl型免疫反应抵抗弓形虫感染,但由于弓形虫有三个感染时期：速殖子,缓殖子(存在于包囊)和子孢子(存在于卵囊),从而使基于弓形虫单一感染阶段的抗原的疫苗不能产生完整的抗弓形虫的保护作用。因此,构建含有弓形虫多生活史时期抗原组成的多价疫苗是十分必要的。我们从弓形虫速殖子,缓殖子以及子孢子时期的抗原中筛选出7个富含CD8+T细胞表位的抗原蛋白片段SAG3101-144,ROP18347-396,MIC6288-347,GRA7182-224,MAG158-125,BAG1156-211和SPA142-200,及1个CD4+T细胞表位,AS15,并将它们连接起来构建了弓形虫多阶段抗原片段；并与泛素佐剂连接,构建表达泛素-弓形虫多阶段抗原的重组DNA和腺病毒疫苗；我们将这两种疫苗单独和联合免疫小鼠,通过酶联免疫吸附试验及流式细胞术方法检测小鼠免疫后所产生的体液和细胞免疫水平,并评估疫苗抗Ⅰ型和Ⅱ弓形虫攻击的保护性。结果显示,重组DNA疫苗在诱导产生体液免疫方面具有优势,相比于重组腺病毒疫苗来说可以诱导产生更高水平的抗体IgG及IgG2a;而重组腺病毒疫苗则能更有效的提高细胞免疫反应水平,诱导产生Th1型细胞因子IL-2,IFN-γ,而且脾细胞增殖增殖水平有明显提高,流式细胞术检测脾淋巴细胞分型的实验结果可以看出T淋巴细胞增多,且以CD8+T细胞亚群为主。在对小鼠使用不同免疫策略进行预防接种的实验中,结果显示先DNA疫苗后腺病毒疫苗免疫策略则能够诱导产生最强的体液免疫和细胞免疫水平。而且这种免疫策略可使小鼠在Ⅰ型RH株弓形虫速殖子感染时获得最高的生存率(67%),并在Ⅱ型PRU株弓形虫包囊感染时脑内包囊形成数目最低(296±92)。综上所述,本研究证实表达泛素-弓形虫多阶段抗原的重组DNA和腺病毒疫苗通过异源性的免疫策略(先DNA疫苗后腺病毒疫苗)可保护小鼠抵抗弓形虫的急性和慢性感染,是一种有潜力的候选疫苗,为未来研制有效的弓形虫疫苗奠定了基础。