高山榕果实缩合单宁结构与生物活性研究

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缩合单宁结构组成复杂多样,多样的结构特性也赋予其丰富独特的生物活性。近年来,缩合单宁在保健品、化妆品、食品、医药、化工等领域得到了广泛应用。相较于人工合成的小分子,缩合单宁具有环保、天然无毒害、易获取、得率高等优势。本研究以高山榕果实中的缩合单宁为材料展开实验,采用超声提取结合葡聚糖凝胶过柱从高山榕果实中提取缩合单宁,进行总酚及可溶性缩合单宁含量测定,含量分别为 596±7.6mg GAE/g DW 和 94.7±1.1mg GAE/g DW。通过 NMR、Q-Exactive LC MS、MALDI-TOF MS三种方法联合解析缩合单宁结构,发现缩合单宁的主要成分是原花青定(PC),还含有少量的原天竺葵定(PP),其最高聚合度可达二十聚体。高山榕果实缩合单宁生物活性研究主要从两个方面进行。首先,在体外通过DPPH、ABTS及FRAP法检测抗氧化能力,结果表明缩合单宁具有强抗氧化能力,相同浓度下,甚至高于Vc。以LO2为模型,采用MTT法和流式细胞法检测缩合单宁对细胞增殖和ROS的影响,结果显示,缩合单宁不影响细胞增殖,但能够有效清除细胞内的ROS。同时检测缩合单宁对细胞内氧化通路相关基因和蛋白的影响,结果表明,缩合单宁在基因转录水平和蛋白水平均可上调Nrf2、HO-1、CAT、GCS和SOD1的表达。通过体外酶学实验发现缩合单宁对mTYR有强烈的抑制效果,单酚酶和二酚酶的IC50值为37.265μg/mL和39.817 μg/mL。对二酚酶的抑制表现为可逆的非竞争型抑制类型。以B16F10为模型,缩合单宁能有效抑制细胞内黑色素含量和酪氨酸酶的活力。qRT-PCR和western blot结果表明,缩合单宁能够通过激活Akt信号通路、抑制CREB和ERK信号通路,协同调控MITF的表达,导致下游TYR家族蛋白的表达水平下调,最终抑制黑色素的生成。综上,探究缩合单宁在抗氧化和抑制黑色素生成中的效果和作用机制,为更好开发和利用高山榕果实缩合单宁的生物活性,将其发展为新型的天然抗氧化剂和酪氨酸酶抑制剂提供一定可行性的参考。
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