穿山龙水提物对ANIT诱导急性肝损伤的保护作用研究

来源 :大连医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:wlc198812
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目的:探讨穿山龙水提物(Water extract from Dioscorea nipponica Makino,WEDN)对α-萘异硫氰酸酯(Alpha-naphthylisothiocyanate,ANIT)诱导小鼠急性肝损伤的保护作用。方法:(1)取穿山龙药材2.0 kg,加入4L蒸馏水,回流提取2次,每次2小时。合并滤液,减压蒸馏得到浓缩液,加入95%乙醇沉淀样品并离心得沉淀,干燥后以葡萄糖为标准品,UV法测定穿山龙水提物中的多糖含量;(2)在ANIT诱导的小鼠急性肝损伤实验中,将60只昆明小鼠随机分为空白组、模型组、低剂量给药组(WEDN,100 mg/kg)、中剂量给药组(WEDN,200 mg/kg)、高剂量给药组(WEDN,400 mg/kg)和单纯给药组(WEDN,400 mg/kg),每组10只。口服WEDN7天后,小鼠腹腔内注射50 mg/kg ANIT溶液(10 mg/ml),诱导急性肝损伤,禁食24小时后称重,并处死,取小鼠血清和肝脏。测定小鼠肝重和血清ALT和AST酶活力,并采用HE染色进行组织病理学分析,同时测定血清中髓过氧化物酶(MPO)和总胆红素(TBIL)含量;采用免疫荧光、Western blotting及Real-time PCR的方法考察WEDN对肝脏中炎症相关基因和蛋白表达的影响。结果:(1)穿山龙水提物中多糖含量为54.08±1.31%;(2)WEDN能够显著降低小鼠血清中的AST(19.44±1.52 U/L vs.55.19±1.65 U/L)和ALT(14.50±1.52U/L vs.32.47±1.94 U/L)酶活性,以及血清MPO和TBIL的含量;HE染色结果表明给予WEDN后,肝脏组织坏死面积缩小,肝细胞损伤程度减轻,这些结果表明WEDN对ANIT诱导急性肝损伤有保护作用。分子机制研究表明WEDN能够显著下调肝脏组织中TLR2、TLR4、COX-2、NF-κB、HMGB1和AP-1的等炎症相关蛋白的表达水平,以及TNF-α、IL-1β和IL-6等炎症因子的m RNA表达水平。结论:穿山龙水提物对ANIT诱导的小鼠急性肝损伤具有较好的保护作用,这种作用是通过抗炎机制来实现的。
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