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痤疮丙酸杆菌是痤疮的重要发病原因之一，是痤疮炎症反应的重要因素。痤疮丙酸杆菌生物膜形态在痤疮皮损中广泛存在。本研究将探讨痤疮丙酸杆菌生物膜的耐药情况及其对人角质形成细胞的炎症反应应答的影响机制，主要分三大部分:
首先，利用痤疮丙酸杆菌标准株ATCC11827构建生物膜体外模型，结合CLSM与XTT减低法观察其生物膜的成膜规律。结果发现第8天生物膜结构最成熟。该生物膜模型构建方法稳定、重复性好，为后续研究奠定了良好的实验基础。随后我们对32株痤疮丙酸杆菌临床分离株的悬浮菌状态和生物膜状态分别进行五种常用抗生素(红霉素、克林霉素、四环素、多西环素和米诺环素)药物敏感性测定。结果悬浮菌耐药率分别为6.25％、34.38％、3.13％、3.13％和0％。生物膜的以上各种药物耐药率分别为18.75％、93.8％、6.25％、31.25％和3.13％。实验结果揭示痤疮丙酸杆菌生物膜形成后抗生素药物敏感性降低，耐药率增加。
然后在第二章我们探讨ALA-PDT疗法对痤疮丙酸杆菌生物膜的抑制效应。我们分三节分别探索了不同ALA药物浓度、不同ALA孵育时间和不同的光照强度作用下ALA-PDT疗法对痤疮丙酸杆菌生物膜的抑制效应，通过CLSM和XTT减低法来进行评定。结果发现ALA药物(10mM、50mM、100mM)浓度越高生物膜结构破坏越严重，生物膜活力抑制越显著。ALA药物孵育时间(15min、30min和60min)越长生物膜结构破坏越严重，生物膜活力抑制越明显。光照强度(50J/cm2、100J/cm2和200J/cm2)越强生物膜结构破坏越严重，生物膜活力抑制越显著。实验结果揭示ALA高浓度、长孵育时间和高剂量光照强度有助于抑制痤疮丙酸杆菌生物膜。另外我们还使用新型光敏剂LP4i对痤疮丙酸杆菌生物膜进行光动力作用研究，发现药物浓度为10mM、光照强度为50J/cm2就能对生物膜结构和活力造成显著破坏。提示其杀菌效果强于经典药物ALA。
进一步我们在第三章探索痤疮丙酸杆菌生物膜是如何诱导人角质形成细胞TLR2介导的炎症反应机制。首先以使用痤疮丙酸杆菌，痤疮丙酸杆菌生物膜和培养基空白对照对人角质形成细胞进行共孵育。通过q-PCR、ELISA方法检测发现痤疮丙酸杆菌生物膜组前炎症因子IL-6、IL-8和TNF-α表达水平显著高于痤疮丙酸杆菌组和培养基空白对照组。表明痤疮丙酸杆菌生物膜在诱导角质形成细胞的炎症反应方面强于悬浮液状态。然后我们通过q-PCR、Westernblotting、免疫荧光和ELISA等方法检测在痤疮丙酸杆菌生物膜诱导角质形成细胞TLR2的表达情况、其下游信号分子MAPK、ERK1/2和NF-κB的磷酸化情况、NF-κB-p65入核情况及下游前炎症因子IL-6、IL-8和TNF-α的表达情况。结果发现痤疮丙酸杆菌生物膜能够上调角质形成细胞TLR2的表达、促使MAPK、ERK1/2和NF-κB的磷酸化水平升高、促进NF-κB-p65入核和促进IL-6、IL-8和TNF-α的表达升高。另外我们还进一步探索TLR2及其下游信号分子抑制剂(TLR2抑制剂(C29)，MyD88抑制剂(ST2825)，NF-κB抑制剂(BAY11-7082)、p38MAPK抑制剂(SB203580)及ERK1/2抑制剂(U0126))对痤疮丙酸杆菌生物膜作用下的角质形成细胞前炎症因子表达情况的影响。结果显示抑制剂能够下调痤疮丙酸杆菌生物膜刺激角质形成细胞产生的炎症效应。实验结果揭示痤疮丙酸杆菌生物膜是通过诱导角质形成细胞TLR2信号通路来影响炎症反应。
首先，利用痤疮丙酸杆菌标准株ATCC11827构建生物膜体外模型，结合CLSM与XTT减低法观察其生物膜的成膜规律。结果发现第8天生物膜结构最成熟。该生物膜模型构建方法稳定、重复性好，为后续研究奠定了良好的实验基础。随后我们对32株痤疮丙酸杆菌临床分离株的悬浮菌状态和生物膜状态分别进行五种常用抗生素(红霉素、克林霉素、四环素、多西环素和米诺环素)药物敏感性测定。结果悬浮菌耐药率分别为6.25％、34.38％、3.13％、3.13％和0％。生物膜的以上各种药物耐药率分别为18.75％、93.8％、6.25％、31.25％和3.13％。实验结果揭示痤疮丙酸杆菌生物膜形成后抗生素药物敏感性降低，耐药率增加。
然后在第二章我们探讨ALA-PDT疗法对痤疮丙酸杆菌生物膜的抑制效应。我们分三节分别探索了不同ALA药物浓度、不同ALA孵育时间和不同的光照强度作用下ALA-PDT疗法对痤疮丙酸杆菌生物膜的抑制效应，通过CLSM和XTT减低法来进行评定。结果发现ALA药物(10mM、50mM、100mM)浓度越高生物膜结构破坏越严重，生物膜活力抑制越显著。ALA药物孵育时间(15min、30min和60min)越长生物膜结构破坏越严重，生物膜活力抑制越明显。光照强度(50J/cm2、100J/cm2和200J/cm2)越强生物膜结构破坏越严重，生物膜活力抑制越显著。实验结果揭示ALA高浓度、长孵育时间和高剂量光照强度有助于抑制痤疮丙酸杆菌生物膜。另外我们还使用新型光敏剂LP4i对痤疮丙酸杆菌生物膜进行光动力作用研究，发现药物浓度为10mM、光照强度为50J/cm2就能对生物膜结构和活力造成显著破坏。提示其杀菌效果强于经典药物ALA。
进一步我们在第三章探索痤疮丙酸杆菌生物膜是如何诱导人角质形成细胞TLR2介导的炎症反应机制。首先以使用痤疮丙酸杆菌，痤疮丙酸杆菌生物膜和培养基空白对照对人角质形成细胞进行共孵育。通过q-PCR、ELISA方法检测发现痤疮丙酸杆菌生物膜组前炎症因子IL-6、IL-8和TNF-α表达水平显著高于痤疮丙酸杆菌组和培养基空白对照组。表明痤疮丙酸杆菌生物膜在诱导角质形成细胞的炎症反应方面强于悬浮液状态。然后我们通过q-PCR、Westernblotting、免疫荧光和ELISA等方法检测在痤疮丙酸杆菌生物膜诱导角质形成细胞TLR2的表达情况、其下游信号分子MAPK、ERK1/2和NF-κB的磷酸化情况、NF-κB-p65入核情况及下游前炎症因子IL-6、IL-8和TNF-α的表达情况。结果发现痤疮丙酸杆菌生物膜能够上调角质形成细胞TLR2的表达、促使MAPK、ERK1/2和NF-κB的磷酸化水平升高、促进NF-κB-p65入核和促进IL-6、IL-8和TNF-α的表达升高。另外我们还进一步探索TLR2及其下游信号分子抑制剂(TLR2抑制剂(C29)，MyD88抑制剂(ST2825)，NF-κB抑制剂(BAY11-7082)、p38MAPK抑制剂(SB203580)及ERK1/2抑制剂(U0126))对痤疮丙酸杆菌生物膜作用下的角质形成细胞前炎症因子表达情况的影响。结果显示抑制剂能够下调痤疮丙酸杆菌生物膜刺激角质形成细胞产生的炎症效应。实验结果揭示痤疮丙酸杆菌生物膜是通过诱导角质形成细胞TLR2信号通路来影响炎症反应。