丁苯酞对衰老大鼠学习记忆能力及RhoA/ROCK2信号通路关键分子影响的研究

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目的:通过观察丁苯酞(Dl-3-n-butylphthalide,Dl-NBP)对衰老大鼠学习记忆能力及Rho A/ROCK2信号通路关键分子的影响,探讨Dl-NBP在衰老相关学习记忆能力障碍的作用机制。方法:1.体外实验中用过氧化氢溶液(H2O2)处理小鼠神经母细胞瘤细胞(Neuro-2a,N2a),建立细胞衰老模型,分为Con组(Control group,Con)和Dl-NBP组(Dl-3-n-butylphthalide,Dl-NBP),Con组不予以任何干预,Dl-NBP组在Con组基础上予以Dl-NBP10μmol/L作用24h,收集样本待检。2.体内实验中将30只18月龄雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠随机分为Con组和Dl-NBP组:Dl-NBP组予以溶入植物油的Dl-NBP40 mg/kg.d灌胃,连续2个月,Con组给予等量植物油。采用Morris水迷宫进行动物行为学测试后收集样本待检。3.采用免疫组化(Immunohistochemical,IHC)技术检测样本中Syn、PSD95和p-CREB-1(133)的表达部位。4.Western blot检测样本中Rho A、ROCK2、Syn、PSD95和p-CREB-1(133)的表达水平结果:1.体外实验:WB结果显示,与Con组比较,Dl-NBP组中Rho A和ROCK2的表达均降低,差异有统计学意义(P<0.05);Syn、PSD95、p-CREB-1(133)的表达均增加,差异有统计学意义(P<0.05)。2.Morris水迷宫结果:与Con组相比,Dl-NBP组大鼠探索平台的时间较短,跨越目标象限的次数增加,差异有统计学意义(P<0.05)。3.免疫组化结果:突触相关蛋白Syn、PSD95和p-CREB-1(133)在大鼠海马组织中广泛表达,PSD95和p-CREB-1(133)主要表达于神经细胞膜上,Syn主要表达于神经元的胞质中。4.在体实验显示:与Con组比较,Dl-NBP组Rho A和ROCK2总蛋白表达降低,差异有统计学意义(P<0.05);Syn、PSD95、p-CREB-1(133)的表达均增加,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:丁苯肽能够改善老龄大鼠的学习记忆能力,其作用机制可能与促进突触相关蛋白的表达,抑制Rho A和ROCK2表达有关。
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