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目的:从体内及体外水平研究杜仲绿原酸（CGA）对肝缺血再灌注损伤（HIRI）保护作用的机制。方法:1.体内水平:将24只大鼠随机分为假手术组（Sham）、缺血再灌注+CGA组（I/R+CGA）和缺血再灌注组（I/R）,I/R+CGA组予20 m L/kg.d杜仲CGA灌胃,连续预处理10d,I/R+CGA组及I/R组建立大鼠HIRI模型（缺血1h,再灌注4h）。建模后取各组肝组织检测以下指标:（1）HE染色观察病理损伤情况并比较病理学评分差异。（2）采用ROS荧光探针（DHE）检测大鼠HIRI肝组织ROS的生成情况。（3）杜仲CGA对大鼠HIRI无菌炎症反应的影响:（1）Western-blot检测肝组织中IRF-1表达水平,免疫沉淀（IP）联合Western-blot检测乙酰化HMGB1（Ac-HMGB1）水平。（2）采用RT-q PCR和Western-blot法分别检测HMGB1、RAGE、TLR-4 m RNA及蛋白含量。（3）Western-blot检测TLR-4/NF-κB信号通路相关蛋白:My D88、P65、P-p65、P-IκB-α、IκB-α、IL-1β、TNF-α表达水平。（4）杜仲CGA对大鼠HIRI所致细胞凋亡的影响:（1）采用TUNEL染色检测各组肝组织细胞凋亡情况。（2）Western-blot检测线粒体凋亡途径相关蛋白:BCL-2、Bax、Cyt-c、Cleaved-caspase9、Cleaved-caspase3、ENDOG、AIF表达水平。2.体外实验:（1）进一步明确杜仲CGA对HIRI无菌炎症反应的保护机制:对正常人肝细胞系HL-7702（L02）进行细胞培养传代并构建TLR-4过表达L02细胞株,采用CCK8法检测CGA对L02细胞活力的影响,选取低、中、高剂量杜仲CGA与TLR-4过表达L02细胞作用48小时,Western-blot检测TLR-4蛋白表达水平,确定杜仲CGA最佳剂量。细胞分为正常L02细胞对照组（NC）、TLR-4过表达组（OE）和OE+CGA组,OE+CGA组予CGA预处理48h,收集细胞后采用Western-blot法检测TLR-4/NF-κB信号通路蛋白:TLR-4、My D88、P65、P-p65、P-IκB-α和IκB-α表达水平。（2）进一步明确杜仲CGA对HIRI凋亡的保护机制:（1）细胞分为NC组、L02细胞缺氧/复氧组（H/R）和H/R+CGA低、中、高剂量组,后者分别予低、中、高剂量杜仲CGA与L02细胞培养48h,H/R组及CGA预处理组均建立H/R模型（缺氧6h,复氧12h）。收集细胞Western-blot检测各组Cleaved-caspase3表达情况,确定杜仲CGA最佳剂量。（2）细胞分为NC组、H/R组和H/R+CGA组,细胞处理同前,收集各组细胞检测以下指标:（A）采用ROS荧光探针（DCFH-DA）及流式细胞术检测各组ROS生成水平。（B）采用线粒体膜电位依赖的荧光探针（Mito-Tracker Red CMXRos）和细胞凋亡荧光探针（Annexin V-FITC）检测线粒体损伤及细胞凋亡情况。（C）Western-blot法检测杜仲CGA对线粒体凋亡途径相关蛋白BCL-2、Bax、Cyt-c、Cleaved-caspase9、Cleaved-caspase3、ENDOG、AIF表达水平的影响。结果:1.体内实验:（1）I/R+CGA组肝组织病理评分明显低于I/R组（P＜0.017）。（2）与I/R组比较,I/R+CGA组ROS荧光强度明显减弱（P＜0.01）。（3）杜仲CGA对大鼠HIRI无菌炎症反应的影响:（1）I/R+CGA组IRF-1及Ac-HMGB1表达水平较I/R组明显下降（P＜0.01）;（2）相较于I/R组,I/R+CGA组HMGB1、TLR-4、RAGE m RNA及蛋白的表达明显降低（P＜0.01）;（3）I/R+CGA组My D88、P65、P-p65、P-IκB-α、IL-1β、TNF-α蛋白表达水平较I/R组显著降低（P＜0.01）,而IκB-α蛋白表达水平显著高于I/R组（P＜0.01）。（4）杜仲CGA对大鼠HIRI肝组织细胞凋亡的影响:（1）TUNEL结果显示,相比I/R组,I/R+CGA组凋亡细胞明显减少（P＜0.01）。（2）与I/R组比较,I/R+CGA组BCL-2表达明显上升（P＜0.05）,而Bax、Cyt-c、Cleaved-caspase9、Cleaved-caspase3、ENDOG、AIF等蛋白表达则明显下降（P＜0.05）。2.体外实验:（1）杜仲CGA体外对HIRI无菌炎症反应的保护机制:经鉴定,TLR-4过表达L02细胞株构建成功;CCK8检测结果表明,杜仲CGA（12.5~200μM）对L02细胞无毒性作用（P＜0.05）,且200μM杜仲CGA降低TLR-4蛋白表达水平最明显（P＜0.01）,为杜仲CGA最佳实验浓度。与OE组比较,OE+CGA组细胞中TLR-4、My D88、P65、P-p65、P-IκB-α蛋白表达水平显著降低（P＜0.05）,而IκB-α蛋白表达水平明显升高（P＜0.05）。（2）杜仲CGA对HIRI所致细胞凋亡的保护机制:（1）H/R+CGA中、高剂量组Cleaved-caspase3蛋白水平较H/R组明显下降（P＜0.05）,以高剂量组（200μM）最为明显（P＜0.01）,此剂量为最佳剂量。（2）H/R+CGA组ROS荧光水平较H/R组明显下降（P＜0.01）。（3）与H/R组比较,H/R+CGA组细胞中线粒体荧光强度增强,细胞凋亡减少（P＜0.01）。（4）与H/R组比较,H/R+CGA组BCL-2表达明显上升（P＜0.05）;Bax、Cyt-c、Cleaved-caspase9、Cleaved-caspase3、ENDOG、AIF蛋白表达明显下降（P＜0.05）。结论:本次研究提示:杜仲CGA可通过减少HIRI时ROS的生成,抑制HIRI时HMGB1/TLR-4/NF-κB信号通路介导的无菌炎症反应,减轻HIRI所致线粒体损伤,从而可发挥对HIRI的保护效应。