【摘 要】
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目的:本研究拟通过对耐药性癫痫的血清外泌体进行蛋白组学研究,寻找耐药性癫痫潜在的生物标记物,并在耐药性癫痫组差异性表达的蛋白选择ITGAX进行动物实验,探讨其参与癫痫发作的可能机制。方法:1.纳入耐药性癫痫患者、临床治疗效果好的癫痫患者以及年龄性别相匹配的健康对照者各10例,对各组血清外泌体进行蛋白组学研究,并使用生物信息学进行GO和KEGG分析。2.通过生物信息学富集分析,选择ITGAX在动物实
【基金项目】
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国家自然科学基金委,地区基金项目,81660227,线粒体动力学失衡调控ENT1参与癫痫发病机制的研究； 贵州省教育厅,研究生教育创新项目,GZZ2017004,遵义医学院神经病学研究生工作站；
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目的:本研究拟通过对耐药性癫痫的血清外泌体进行蛋白组学研究,寻找耐药性癫痫潜在的生物标记物,并在耐药性癫痫组差异性表达的蛋白选择ITGAX进行动物实验,探讨其参与癫痫发作的可能机制。方法:1.纳入耐药性癫痫患者、临床治疗效果好的癫痫患者以及年龄性别相匹配的健康对照者各10例,对各组血清外泌体进行蛋白组学研究,并使用生物信息学进行GO和KEGG分析。2.通过生物信息学富集分析,选择ITGAX在动物实验中研究癫痫发生的可能机制,采用免疫印迹检测ITGAX在正常组和癫痫组的血清外泌体和海马中的表达情况。3.使用尾静脉注射ITGAX腺相关敲减病毒干预癫痫模型,并分为正常对照组（Control）、匹罗卡品组（癫痫组）（Pilo）、匹罗卡品+ITGAX敲低组（Pilo+ITGAX-）、匹罗卡品+空病毒组（Pilo+Vehicle）,免疫印迹检测各组海马中ITGAX的变化情况,行为学评估各组小鼠癫痫发作潜伏期情况,并检测各组血脑屏障变化情况:免疫印迹检测海马中白蛋白表达、ELISA检测血清中S100β的水平。4.使用腹腔注射外泌体抑制剂干预癫痫模型,并分为正常对照组（Control）、匹罗卡品组（Pilo）、匹罗卡品+GW4869外泌体抑制剂组（Pilo+GW4869）、匹罗卡品+溶剂对照组（Pilo+DMSO）。免疫印迹检测各组海马中ITGAX的变化情况,行为学评估各组小鼠癫痫发作潜伏期情况,并检测各组血脑屏障变化情况:免疫印迹检测海马中白蛋白表达、ELISA检测血清中S100β的水平。结果:1.蛋白组学分析发现:与健康对照组相比,在耐药性癫痫组中有66种蛋白质显著上调,有63种蛋白组显著下调;与临床治疗效果良好的癫痫患者组相比,在耐药性癫痫组中,有289种蛋白显著上调,有301种蛋白显著下调。维恩图分析发现对比正常组和临床治疗效果好的癫痫组,在耐药性癫痫组中发现了43种显著变化的蛋白。生物信息学表明这43种蛋白主要富集于免疫反应、细胞粘附分子结合以及氨基酸代谢等方面,且免疫反应占主导地位。差异性蛋白ITGAX是免疫反应及细胞粘附方面中变化最为显著的蛋白。2.ITGAX在正常和癫痫模型血清外泌体中的表达情况:与正常组相比,癫痫组的血清外泌体中ITGAX的蛋白水平上调,P＜0.05。3.ITGAX在正常和癫痫模型海马组织中的表达情况:与正常组相比,癫痫组的海马组织中ITGAX的蛋白水平上调,P＜0.05。4.使用尾静脉注射ITGAX腺相关敲减病毒干预后,与匹罗卡品+空病毒组（Pilo+Vehicle）相比,匹罗卡品+ITGAX敲低组（Pilo+ITGAX-）海马中的ITGAX表达下调,癫痫发作的潜伏期明显延长,海马中白蛋白表达降低,血清中S100β的水平降低,P＜0.05。5.使用腹腔注射外泌体抑制剂干预后,与匹罗卡品+溶剂对照组（Pilo+DMSO）相比,匹罗卡品+GW4869外泌体抑制剂组（Pilo+GW4869）海马中的ITGAX表达下调,癫痫发作的潜伏期明显延长,海马中白蛋白表达降低,血清中S100β的水平降低,P＜0.05。结论:1.与健康对照组和临床治疗效果良好的癫痫患者相比,耐药性癫痫血清外泌体的差异性蛋白主要富集于免疫反应、细胞粘附分子结合以及氨基酸代谢等方面。2.ITGAX通过外泌体介导,从外周血清进入中枢神经系统在海马中高表达,其参与癫痫发作机制可能与血脑屏障通透性改变相关。
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