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目的：建立膜片钳全细胞记录技术平台，以L-型钙离子通道为切入点，探讨应激对大鼠心室肌细胞电活动的影响及其发生机制，认识L-型钙离子通道电活动的变化在应激致心肌损伤发生中的意义。方法：建立心肌细胞急性和慢性应激实验模型；膜片钳全细胞记录模式记录急、慢性应激状态下心室肌细胞离子通道电流的变化情况，并以L-型钙离子通道为研究重点，记录通道稳态激活与失活曲线，探讨通道电流峰值改变的电生理学特征；通过心室肌细胞PKA活性测定和PKI阻断实验观察急性应激对心室肌细胞PKA传导通路的影响，并通过RT—PCR、Northern印迹杂交等分子生物学方法观察慢性应激对心室肌细胞L-型钙离子通道基因表达的影响，探讨急、慢性应激下心室肌细胞L-型钙离子通道电流改变发生的分子机制；应用Fura-2／AM荧光分光光度法观察L-型钙离子通道电流改变对心室肌细胞内钙稳态的影响，并以细胞凋亡检测法（FCM和TUNEL法）和电镜观察心肌组织超微结构来检测L-型钙离子通道电流改变状态下的心肌损伤状况，以阐明L-型钙离子通道在应激致心肌损伤发生机制中的作用。结果：（1）建立了膜片钳全细胞记录技术平台，获得了高稳定性的正常心室肌细胞全细胞离子通道电流图；（2）急性应激状态下，心室肌细胞INa明显增大，IK的幅值增大，ICa-L幅值也明显增大（p＜0.05），且呈剂量依赖性趋势；急性应激致心室肌细胞L-钙离子通道电流激活特性发生改变，其半数最大激活膜电位V1/2由-0.694±0.36mV移至-14.59±0.24mV（p＜0.05，n=5），通道变得更易于激活，但并未观察到失活特性明显改变；急性应激条件下心室肌细胞PKA活性显著上升，PKI（PKA活化阻断剂）阻断实验表明应激致PKA激活是L-型钙离子通道电流增大的重要机制之一；（3）慢性束缚应激可导致心室肌细胞L-型钙离子通道电流明显增大，但未观察到其对通道激活、失活特性的影响；RT—PCR及Northern印迹杂交结果显示应激可使心室肌细胞L-型钙离子通道基因表达明显上升，提示慢性应激致心室肌细胞L-型钙离子通道电流增大的分子机制可能在于心室肌细胞L-型钙离子通道基因表达上升所引起的相应通道蛋白量的增多；（4）急性应激所致L-型钙离子通道电流的增大可导致心室肌细胞内Ca2+浓度明显上升引起胞浆内Ca2+超载，心室肌细胞凋亡率显著性升高；慢性应激致心肌超微结构发生明显变化，表现为心肌细胞核膜皱缩，核周隙扩张，线粒体肿胀、峭排列紊乱，肌丝断裂或溶解样变化。结论：急、慢性应激可导致。0室肌细胞L一型钙离子通道电流幅值明显增大，其作用机制分别与心室肌细胞PKA信号传导途径的激活和L一型钙离子通道基因表达的上升有关，应激心室肌细胞1。aL异常增大引起的细胞内＊”超载可导致心室肌细胞损伤。这些研究发现为我们认识应激致心肌损伤发生的机制研究提出了新的启示，并将为心血管疾病的防治研究提供新的实验依据和思路。