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珙桐(Davidia involucrata Baill.),我国特有的单型属珍稀孑遗植物,国家一级保护植物。珙桐在植物系统发育与演化以及地史变迁研究方面有很高的科学价值;其花形似白鸽,具有极高的观赏价值。光叶珙桐(Davidia involucrata var.vilmoriniana (Dode)Wanger),珙桐的变种,国家二级保护植物。
本研究从形态学、细胞学、分子水平比较分析珙桐和光叶珙桐的差别;在建立起适合珙桐的ISSR体系和AFLP体系的基础上,借助ISSR、AFLP两种分子标记考察湖北省8个珙桐居群229个个体的遗传多样性。主要的研究结果如下:
1.通过对珙桐和光叶珙桐叶、花、果的实体、种子内含物检测以及两者大小孢子发生与雌雄配子体发育过程的观察,未发现两者的明显差异。珙桐的头状花序由多数雄花和一朵两性花组成,花序基部有对生叶状纸质的大苞片。子房为多心皮复雌蕊,通常6-8室,多者10室,每室1胚珠,胚珠有败育现象,胚与胚乳的主要内含物均为蛋白质。
2.胚珠中大孢子母细胞经减数分裂形成直线形排列的4个大孢子,合点端发育成功能大孢子,珠孔端三个退化,胚囊的发育类型为蓼型,成熟胚囊为七胞八核胚囊。雄蕊花药深红色,小孢子母细胞减数分裂后形成的四分体为四面体型,成熟花粉为二胞花粉。在珙桐大小孢子发生及雌雄配子体发育过程中未见异常现象。
3.根据对rDNA中ITS序列比对分析,虽然在珙桐和光叶珙桐rDNA区段的个别碱基位点上存在多态性,但未找到两者的明确不同,说明两者在ITS区域不存在明显差异。
4.ISSR、AFLP两种分子标记检测珙桐和光叶珙桐的不同个体未发现明显差异条带,个体间相似性系数的UPGMA聚类分析发现珙桐和光叶珙桐的不同个体并没有分别聚在一起。
5.10条ISSR引物检测到127个位点,多态位点百分率为93.81%。各居群多态位点百分率在40.21%~76.29%之间,平均为58.64%。总的居群基因多样性(Ht)为0.2927,种群间基因间分化度(Gst)为26.27%,基因流Nm为1.4。
6.7组EcoRI/MseI引物共检测到506个位点,多态位点百分率为96.44%,各居群多态位点百分率在52.77%~79.25%之间,平均为67.37%。总的居群基因多样性(Ht)为0.3506,种群间基因间分化度(Gst)为21.60%,基因流Nm为1.8。
在形态学、细胞学、分子水平研究中未见珙桐和光叶珙桐的明显差别,本研究结果不支持光叶珙桐为珙桐的变种的观点,因此珙桐与光叶珙桐的分类关系还有待进一步商榷;AFLP、ISSR两种分子标记分析显示珙桐具有较高的遗传多样性,遗传变异主要存在于居群内,居群间存在一定的遗传分化。综合相关研究结果,提出珙桐的保护策略。