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目的:对兔来源的骨髓间充质干细胞(BMSCs)进行培养、传代、鉴定、冻存备用,并制备山药含药血清备用;经后外侧入路抽吸髓核法建立兔椎间盘退变模型载体以备移植修复治疗;探讨山药含药血清联合BMSCs移植修复兔椎间盘退变的可行性研究。 方法:1.运用改良的全骨髓培养法对兔的BMSCs进行分离、培养、传代,并观察其形态、生长特性,鉴定其表面标志物后冻存备用;称取3.2g麸炒山药,用20ml生理盐水制备为混悬液,持续给成年新西兰大白兔灌胃处理7d后股动脉采血制备山药含药血清。2.选取新西兰大白兔18只,均经后外侧入路穿刺抽吸L4-6二个阶段椎间盘的髓核,深度为5mm,并取出一部分髓核,L3-4为对照椎间盘。术前、术后4、8、12周对模型载体进行影像学(DR)、组织外观形态学和病理学(HE染色)观察椎间盘的退变过程。3.运用后外穿刺髓核抽吸法对24只新西兰大白兔进行造模,在髓核抽吸完成后立即对每只兔子不同阶段的椎间盘进行相同的移植治疗,L3-4椎间盘行PBS移植;L4-5椎间盘行单纯BMSCs移植,L5-6椎间盘行BMSCs联合山药含药血清移植,术后随机分为2、4、8、12周4个组,术前、术后2、4、8、12周对每组的6只模型兔行影像学(DR)、组织外观形态学和病理学观察。 结果:1.通过观察该细胞形态及生长特性,发现其增殖迅速,短时间内可大量扩增达到移植需要的种子细胞数量要求,并对其细胞表面抗原标志物CD44、CD90进行免疫组化鉴定,检测抗原标志物CD44、CD90为阳性;山药灌胃成功制备出山药含药血清。 2.相比对照椎间盘,影像学:术后4、8、12周实验椎间盘高度指数(DHI)持续下降;组织外观形态学:实验椎间盘瘢痕增多,颜色由乳白色变暗变浑浊;病理学:髓核细胞数量在实验椎间盘中持续减少。3.影像学:术后2、4、8、12周4个不同时间段PBS移植组DHI下降较明显;BMSCs移植组与山药含药血清联合BMSCs移植组DHI下降较缓慢,术后4、8、12周山药含药血清联合BMSCs移植组与BMSCs移植组相比,山药含药血清联合BMSCs移植组DHI下降缓慢。组织外观形态:术后PBS移植组瘢痕组织较多,颜色较暗较浑浊,而BMSCs移植组、山药含药血清与BMSCs复合物的移植组瘢痕组织较少,颜色亮度变化不明显;病理学:术后不同时间段PBS移植组的髓核细胞数量一直在进行性减少,而术后2周后BMSCs移植组、山药含药血清联合BMSCs移植组髓核细胞的数量较PBS移植组明显增多,与BMSCs移植组相比,术后4、8、12周山药含药血清联合BMSCs移植组髓核细胞的数量含量较多。 结论:1.改良的全骨髓培养法成功培养出移植所需的种子细胞BMSCs;山药灌胃成功制备出山药含药血清。2.经后外侧入路抽吸髓核法成功建立兔椎间盘退变模型载体。3.山药含药血清联合BMSCs移植修复兔椎间盘退变的效果优于单纯BMSCS移植组,具有一定的可行性。