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血管生成素样蛋白2(Angiopoietin-like protein 2,Angptl2)属于血管生成素样蛋白家族(angiopoietin-like proteins,ANGPTLs),是一种分泌性糖蛋白,在全身各个器官的不同细胞中都有表达。在缺氧、高压、炎症等刺激下,Angptl2表达会增高,在各种急慢性炎症中被认为是重要的炎症诱导因子。炎症性病变在眼内也非常常见,如眼内炎、角膜炎、视网膜炎、葡萄膜炎等。研究发现当眼内发生炎症性病变时,Angptl2的m RNA表达也会增高,促使巨噬细胞向眼内炎症部位迁移,释放促炎因子白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)和肿瘤坏死因子-a(tumor necrosis factor-a,TNF-a)等。但Angptl2在眼内诱导炎症的机制及通路尚不完全明确。既往研究Angptl2诱导炎症的主要机制是通过结合单核/巨噬细胞来促进促炎症因子的释放。而视网膜中缺乏单核/巨噬细胞,Müller细胞才是视网膜主要且特有的胶质细胞,是视网膜炎症因子的主要来源,贯穿在视网膜的全层,对视网膜起着支架作用。炎症刺激下,Müller细胞反应性胶质激活,GFAP表达增多,分泌大量促炎因子如IL-1β、TNF-α、IL-6、IL-8、趋化因子等参与炎症的发展。因此,我们推测Angptl2可能激活Müller细胞介导视网膜的炎症反应。本课题主要进行以下三个研究:1、观察在LPS玻璃体腔注射诱导的眼内炎症模型中视网膜Angptl2的表达。2、证明Angptl2可以激活视网膜Müller细胞增殖,胶质激活,并促进Müller细胞炎症因子的释放。3、证明Angptl2通过PirB来激活视网膜Müller细胞,调控炎症因子的分泌。目的:研究血管生成素样蛋白2(Angiopoietin-like protein 2,Angptl2)在视网膜介导炎症因子释放的作用和机制。方法:1.将SD大鼠按完全随机法分为LPS组和PBS组,LPS组大鼠玻璃体腔注射0.2mg LPS,对照组加入等体积PBS,RT-PCR检测两组大鼠视网膜Angptl2的表达。2.以原代培养的SD大鼠视网膜Müller细胞为研究对象,按完全随机法随机分为Angptl2组和PBS组,Angptl2组加入外源性Angptl2,对照组加入等体积PBS,细胞计数Müller细胞增殖变化,免疫荧光观察Müller细胞GFAP的表达以及RT-PCR检测促炎因子IL-1β、IL-6、TNF-α的表达变化。3.免疫荧光观察配对免疫球蛋白样受体B(paired immunoglobulin-like receptorB,PirB)在Müller细胞上的表达;Müller细胞外源性加入Angptl2后,再分别转染Ad-PirB-siRNA腺病毒载体和腺病毒对照Ad-C,分为PBS对照组、Angptl2组、Ad-C+Angptl2组、Ad-PirB-siRNA+Angptl2组,RT-PCR观察炎症因子的表达变化。主要结果和结论如下:1.RT-PCR显示LPS组Angptl2 mRNA表达较对照组明显增加,说明LPS玻璃体腔注射诱导眼内急性炎症后,可明显促进视网膜Angptl2的表达。2.细胞增殖折线图与低倍显微镜下皆可观察到Angptl2组较PBS对照组Müller细胞增殖增多,说明Angptl2可促进Müller细胞增殖。3.免疫荧光染色显示Angptl2组较PBS对照组Müller细胞GFAP表达增加,RT-PCR显示Angptl2组较PBS对照组IL-1、IL-6、TNF-α表达增加。Angptl2可以激活视网膜Müller细胞还进一步促进其炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α的分泌,说明Angptl2能促进视网膜Müller细胞参与炎症因子的分泌。4.免疫荧光显示Müller细胞表达Angptl2的配体PirB,体外用腺病毒载体抑制Müller细胞上PirB的表达后,Ad-PirB-siRNA+Angptl2组较Angptl2组和Ad-C+Angptl2组炎症因子IL-6、TNF-α表达降低。提示在视网膜Müller细胞上,Angptl2可能是通过PirB来调控炎症因子的释放。