瑞氏木霉内切葡聚糖酶Ⅰ(EndoglucanaseⅠ，EGI)在降解纤维素的过程中是一种十分重要的酶。该酶作用于纤维素内部的非结晶区，随机水解β-1，4-糖苷键。EGI包含两个结构域，一个是纤维素的催化结构域(catalyticdomains，CD)，一个是纤维素的吸附结构域(cellulose-bindingdomains，CBD)，二者由一个连接区(Linker)连接。 本文意图在不改变EGI的CD和Linker的前提下，对CBD进行随机突变，通过筛选找到与野生型相比纤维素吸附能力改变的CBD，再将其与CD和Linker结合构建杂合酶，比较研究杂合酶的性质，进一步阐明CBD与CD和Linker相互作用降解纤维素的机理。 噬菌体表面展示技术(Phagedisplay)是一种新型的筛选方法，它使表达的外源肽(或者蛋白质的结构域)以融合蛋白的形式展现在噬菌体的表面，并保持相对独立的空间结构和生物活性。与传统筛选手段相比，该技术更加高效，尤其是在亲和筛选方面可以很方便地得到与配体结合能力不同的受体，而且筛选库的容量很大，是一种很适合本研究的筛选方法。近年来，噬菌体表面展示技术亦开始被应用于酶学定向进化的研究。目前，国内外未见有纤维素酶噬菌体展示的报道。如果可以将EGI成功地展示在噬菌体表面，无疑将会对应用该技术进行纤维素酶研究提供有力的帮助，这也是本文的一个工作内容。 本文首先将EGI展示在丝状噬菌体表面，分别用酶联免疫吸附试验(Enzyme-linkedimmunosorbentassay，简称ELISA)和Somogyi方法对其活性进行验证。被展示在噬菌体表面的EGI依然具有纤维素的吸附能力和内切酶活力，其CMC(carboxymethylcellulose)酶活为7.0×10-16IU/pfu，说明EGI被成功展示在丝状噬菌体表面。 然后再将EGI的CBD展示在噬菌体表面，通过ELISA方法验证被展示的CBD依然具有对纤维素的吸附特性。利用易错PCR的方法对CBD基因进行随机突变，建立了一个5×105大小的、可用来进行噬菌体表面筛选的CBD基因突变菌种库。为进一步合理解释吸附后CBD是如何与CD和Linker相互作用降解纤维素的问题提供了实验基础。 此外，利用含EGI和CBD基因的两种重组噬菌体感染大肠杆菌宿主HB2151，在IPTG诱导下表达游离型EGI和CBD。经过胞内、胞外、胞周质各组分蛋白SDS-PAGE电泳分析，发现游离型EGI和CBD主要分泌在大肠杆菌HB2151的胞外。进一步对CBD进行了初步纯化。纯化后的CBD将可以用来测定吸附动力学参数，为探讨研究CBD功能提供有力的实验数据。