【摘 要】
：
目的:动脉钙化是一种类似于骨形成的主动调控过程,其细胞学基础是血管平滑肌细胞（VSMCs）向成骨样细胞分化,表现为成骨相关指标的表达增加。近年来的研究发现,破骨细胞外泌体（OC-Exos）可参与调控成骨细胞的功能。本研究分离小鼠肠系膜VSMCs并建立动脉钙化的体外细胞模型,以OC-Exos干预钙化的VSMCs,检测钙化相关分子的表达,观察OC-Exos对VSMCs成骨样分化的作用,寻求防治动脉钙化
【基金项目】
：
山东省自然科学基金（ZR2019MH087）；
论文部分内容阅读
目的:动脉钙化是一种类似于骨形成的主动调控过程,其细胞学基础是血管平滑肌细胞（VSMCs）向成骨样细胞分化,表现为成骨相关指标的表达增加。近年来的研究发现,破骨细胞外泌体（OC-Exos）可参与调控成骨细胞的功能。本研究分离小鼠肠系膜VSMCs并建立动脉钙化的体外细胞模型,以OC-Exos干预钙化的VSMCs,检测钙化相关分子的表达,观察OC-Exos对VSMCs成骨样分化的作用,寻求防治动脉钙化的新策略。方法:实验分为三个阶段。第一阶段:小鼠VSMCs的分离、鉴定及动脉钙化细胞模型的建立分离小鼠肠系膜VSMCs,利用细胞免疫荧光法（IF）检测α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达来鉴定VSMCs。以10m Mβ-磷酸甘油钠（β-GP）干预VSMCs来建立动脉钙化细胞模型,行免疫印迹法（WB）检测相关钙化分子Runx2、BMP-2的表达,利用茜素红染色法以观察矿化结节的表达情况。第二阶段:破骨细胞（OCs）的分化诱导及外泌体（Exos）的提取购买RAW264.7（小鼠单核巨噬细胞）,利用巨噬细胞集落刺激因子（M-CSF）及核因子κB受体活化因子配体（RANKL）诱导巨噬细胞向OCs分化,以TRAP染色及鬼笔环肽染色进行OCs鉴定。收集OCs上清培养液,利用超速离心法进行提取Exos,电镜观察其直径大小,WB检测Exos特异性跨膜蛋白分子CD63的表达。第三阶段:观察OC-Exos对VSMCs成骨样分化的影响首先,设置4个分组:（1）空白组,（2）钙化组,（3）OC-Exos+钙化组,（4）RAW264.7-Exos+钙化组（观察未分化成为破骨细胞的RAW264.7,其分泌的Exos对VSMCs成骨样分化的影响）。以β-GP诱导（2）（3）（4）组,7天后收集VSMCs,（1）组VSMCs以不含β-GP的完全培养基培养7天后收集细胞,提取细胞总蛋白,利用WB检测钙化相关信号分子Runx2、BMP-2的表达。结果:1、成功获取了小鼠的原代VSMCs,IF结果显示α-SMA表达阳性;WB及茜素红染色结果显示,β-GP可显著增加Runx2、BMP-2的表达和矿化结节的形成。2、TRAP染色和鬼笔环肽染色结果显示,M-CSF和RANKL干预小鼠单核巨噬细胞RAW264.7细胞2天后出现3核以上细胞,即成熟的破骨细胞,随着诱导时间的延长,破骨细胞数量逐渐增多,在第4天时观察到的成熟破骨细胞数量最多。3、收集细胞上清液并提取破骨细胞外泌体,电镜下可观察到60-70nm囊泡结构的外泌体,WB结果显示外泌体特异性标志分子CD63表达阳性。4、破骨细胞外泌体可显著降低VSMCs中Runx2和BMP-2的表达。结论:破骨细胞外泌体对VSMCs的成骨样分化发挥着抑制性作用,这为外源性因子改善动脉钙化提供了新的治疗方向。
其他文献
目的:骨髓间充质干细胞（Bone marrow-derived mesenchymal stem cells,BM-MSCs）成骨能力降低的同时成脂分化能力增加,这与肥胖、糖尿病、年龄相关性骨质疏松症以及各种造血系统疾病有关。本研究旨在探索可以纠正脂肪-成骨分化失衡的小分子,特别是对BM-MSCs成脂分化具有抑制作用的小分子。方法:通过全骨髓细胞培养法分离BM-MSCs,利用BM-MSCs体外成脂
目的:通过回顾性研究对照分析的方法,对比研究围术期右侧腋下小切口与传统正中切口行小儿室间隔缺损矫治手术的临床疗效,通过研究术前、术中、术后患儿的临床指标,探讨右侧腋下小切口治疗患儿先天性室间隔缺损的临床优越性和安全性,总结右侧腋下微创小切口治疗室间隔缺损的体外循环管理经验体会。方法:回顾性分析我院2010年01月至2015年12月期间收治室间隔缺损患儿作为研究对象,严格按照入选标准入选80例,其中
目的:探讨维生素D水平与中重度痴呆患者临床表现的相关性。方法:选取2019年8月～2021年10月在深圳市康宁医院老年精神科认知病区住院,符合《国际疾病分类》第10版（International Classification of Disease-10,ICD-10）中痴呆诊断标准的患者 103 例,根据入排标准,最终纳入中重度痴呆患者70例。在病历系统中获取患者的一般资料、维生素D水平与其他生化
目的:研究免疫球蛋白超家族成员3（immunoglobulin superfamily member 3,IGSF3）在颞叶癫痫（temporal lobe epilepsy,TLE）患者术后颞叶皮层标本及海人酸（kainic acid,KA）慢性癫痫模型小鼠脑中的表达情况,及IGSF3下调对戊四氮（pentylenetetrazol,PTZ）慢性点燃模型小鼠癫痫发作的影响。方法:1.收集8例难治
目的:研究特发性震颤合并帕金森病（ET-PD）患者的临床特点,并分别与特发性震颤（ET）和帕金森病（PD）患者进行比较,从而提高ET-PD的临床诊断正确率。方法:选择2020年10月1日至2021年12月1日就诊于我院帕金森病门诊及神经内科病房的ET-PD、ET及PD患者,各组受试者达到25例后停止纳入。临床上研究发现ET-PD患者发生PD时多处于PD早中期,考虑到PD不同H-Y分期临床症状严重程
目的:通过对济宁医学院附属医院近年来所有行肌肉活检病人的病理结果进行分析,并结合这些病人的临床表现、辅助检查和最终诊断,总结济宁医学院附属医院单中心神经肌肉疾病的疾病谱及构成比例和肌肉活检特征性病理表现,并与山东大学齐鲁医院神经内科行肌肉活检诊断的神经肌肉疾病的构成比进行对比分析,以发现本中心肌肉活检病理诊断的不足,为今后神经肌肉活检病人的筛选提供依据,并提高对各种神经肌肉疾病肌肉活检特征性病理表
目的:本研究的主要目的是探讨2型糖尿病患者的血清胰岛素样生长因子-1（Insulin-like growth factor-1,IGF-1）水平与体质指数、腰围、代谢相关脂肪性肝病、尿酸、空腹血糖、糖化血红蛋白、胰岛素抵抗指数、血脂谱等代谢指标的相关性,为2型糖尿病患者代谢紊乱的管理提供一定的研究依据。方法:本研究选取了2017年07月01日至2021年04月30日在济宁医学院附属医院内分泌科住院
目的:探讨肢体坏死性筋膜炎患者的临床特点、诊断、治疗及预后影响因素,以期为早期诊治及预后评估提供参考。方法:回顾性分析2012年1月～2022年2月济宁医学院附属医院收治的40例肢体坏死性筋膜炎患者的临床资料,概括其临床特点、诊治要领,按照肢体NF患者的预后状况,分为死亡组（n=13）和存活组（n=27）,并讨论影响两组患者预后的临床可能因素。首先采用单因素分析对所有临床指标进行初步筛选,应用二元
目的:神经炎症在帕金森病的发生过程中具有关键作用,众多研究表明lnc-MALAT1在PD模型中发挥重要的调节作用。但lnc-MALAT1在PD的神经炎症过程中的调控作用及机制仍不明确。本文通过小干扰RNA抑制小鼠原代星形胶质细胞lnc-MALAT1的表达,并用MPP+刺激该星形胶质细胞构建神经炎症细胞模型,检测TNF-α、IL-6、IL-1β、Caspase-1以及NLRP3的表达水平,进而比较C