天然免疫是机体古老的抗感染机制之一，其在对抗各种外来病原微生物感染过程中发挥重要作用。维甲酸诱导基因Ⅰ(RIG-Ⅰ)是模式识别受体中尤为重要的一类分子，已经被报道能够直接或间接地识别细胞质中的病毒RNA，其诱导干扰素和促炎症细胞因子的产生，是先天性免疫系统的重要组成部分，对先天性免疫的建立至关重要。细胞因子信号传导抑制物1(SOCS1)蛋白具有细胞因子信号传导的抑制作用，据报道，在细胞中过表达SOCS1，可抑制白介素、干扰素等许多细胞因子的信号传导。
　　单克隆抗体具有特异性好、理化性状均一等优点，临床上，其多用于疾病的诊断和治疗;试验研究中ELISA、Western blotting、IFA等技术手段依赖于单克隆抗体的参与;作为研究过程的重要工具，单克隆抗体在蛋白的表达和功能研究中发挥重要作用。多克隆抗体具有其制备简单、所需周期较短等优点。
　　本试验通过对猪RIG-Ⅰ和SOCS1基因的克隆，构建原核表达载体，对载体进行诱导表达，然后纯化出目的蛋白，作为抗原，对实验动物进行免疫，进而制备单克隆抗体或者多克隆抗体。具体内容如下:
　　1.猪RIG-Ⅰ原核表达载体的构建、蛋白表达纯化及单克隆抗体制备
　　从猪肺泡巨噬细胞中提取RNA，经过反转录得到cDNA模板，根据NCBI上猪RIG-Ⅰ的基因序列，设计引物，扩增出猪RIG-Ⅰ的基因全长。经过酶切、连接、转化等步骤，构建了猪RIG-Ⅰ蛋白的原核表达载体pET28a-pRIG-Ⅰ。通过包涵体变复性得到猪RIG-Ⅰ蛋白，经过Western blot分析验证，得到的猪RIG-Ⅰ蛋白可与标签抗体反生反应，具有良好的反应原性。同时，得到猪RIG-Ⅰ蛋白可与抗人的RIG-Ⅰ蛋白抗体发生特异性结合，说明其具有良好的生物学活性。将其免疫BALB/c小鼠，经过细胞融合，用间接ELISA的方法对杂交瘤细胞株进行筛选，得到猪RIG-Ⅰ蛋白的单克隆抗体，经过Western blot验证，免疫组化检测，IFA以及IPMA的实验结果表明，筛选得到的单抗可与经过293T细胞过表达的猪RIG-Ⅰ蛋白反生特异性反应。
　　2.猪SOCS1原核表达载体的构建、蛋白表达纯化及多克隆抗体制备
　　根据NCB1上猪SOCS1的基因序列，设计引物，从猪总的cDNA模板中扩增出猪SOCS1的基因全长。经过酶切、连接、转化等步骤，构建了猪SOCS1蛋白的原核表达裁体pET28a-p SOCS1，成功构建了猪SOCS1蛋白的原核表达载体pET28a-pSOCS1。经过Western blot分析验证，得到猪SOCS1蛋白可与标签抗体反生反应，具有良好的反应原性。在不同温度、时间、IPTG浓度的条件下摸索猪SOCS1蛋白的最优表达条件，经过镍柱纯化得到猪SOCS1蛋白，为后续制备猪SOCS1单克隆抗体，奠定了基础。将纯化得到猪SOCS1蛋白免疫新西兰大白兔，制备猪SOCS1蛋白的多克隆抗体，并用Western blot和免疫组化的方法对其进行鉴定，结果表明该多抗血清可较好地识别经过293T细胞过表达的猪SOCS1蛋白，为猪SOCS1相关实验研究，检测猪SOCS1的表达水平，提供了实验工具。