目的：　　 环境激素又称环境内分泌干扰物（endocrine disrupting chemicals，EDCs），是指一类能使内分泌功能发生变化，并因此而对个体及其子孙产生有害的外源性化学物质或混合物。壬基酚(nonylphenol，NP)又称为壬基苯酚，属于烷基酚类环境激素。环境中的NP主要来源于壬基酚聚氧乙烯醚的降解，壬基酚聚氧乙烯醚因具有强大的脂溶性能够渗入各种物质中，所以被广泛应用于医药、洗涤剂、塑料、纺织品、化妆品等商品中，因此NP污染范围较为广泛。　　 NP能在生物体中积蓄进而发挥其毒性作用，有研究表明，NP能干扰生殖器的早期发育，降低雌性动物的生育指数和雄性动物的精子存活率;通过消化道积蓄于肝脏和脑后，能够破坏肝脏中超氧化物歧化酶和过氧化氢酶等抗氧化物质，损伤神经细胞，甚至能够通过胎盘影响仔鼠的学习记忆能力;有研究报道壬基酚乙氧基化物对两栖动物心室细胞心肌膜的超微结构具有损伤作用。　　 心肌缺血再灌注损伤（myocardial ischemia reperfusion injury，MIRI）是冠心病治疗后容易产生的一种较为严重的心肌损伤，目前认为MIRI主要与钙超载、自由基爆发、能量代谢、细胞因子和炎症反应等相关。流行病学研究表明，人类对缺血性心脏病的易感与环境激素的污染密切相关，但是NP等环境内分泌干扰物是否加重豚鼠离体心脏缺血再灌注损伤目前尚无研究报道。　　 17β-雌二醇（17β-estradiol，E2）是天然雌激素中活性最强的一种，能够恢复缺血再灌注损伤后的心功能，缓解心肌损伤。NP具有雌激素样作用，其化学结构与E2相似，可竞争性抑制E2与靶器官雌激素受体（Estrogen receptor，ER）结合。NP与ER结合后，通过环磷酸腺苷依赖的信号传导通路，作用于受体，启动一系列雌激素依赖性生理生化过程;亦可通过在不同的靶器官组织中改变雌激素细胞核激素受体的活性，干扰内生的雌激素作用，包括增强或抑制内源性雌激素的活性。有研究报道，NP与E2联合使用后能够增强E2的雌激素作用，但是否能够干扰E2对缺血再灌注损伤的保护作用，目前尚无研究报道。　　 Langendorff灌流装置是研究离体心脏缺血再灌注常用的方法，该法通过配制与血液成分相似的灌流液进行主动脉逆行灌流离体心脏的冠状动脉模拟心脏在体功能。因能够排除心脏在体条件下神经系统的调节作用而被广泛应用于药物对心脏作用等研究中。然而利用Langendoff灌流研究缺血再灌注损伤的方法中仍存在一些问题:如缺血再灌注损伤模型中缺血时间的选取、心脏缺血再灌注后进行TTC染色最适宜的观察时间和Langendorff灌流系统的稳定性等。　　 因此基于以上疑问，本研究首先通过制备豚鼠离体心脏缺血再灌注模型，明确该模型中TTC染色法的适宜观察时间及计算方法，并确定适宜的缺血时间。其次，通过观察离体豚鼠心功能等指标确定NP直接灌流心脏是否能对心脏产生毒性作用和NP作用于缺血再灌注期间能否加重离体心脏缺血再灌注损伤，并进一步探索NP是否能够干扰E2对豚鼠离体心脏缺血再灌注损伤的保护作用。　　 方法：　　 豚鼠离体心脏进行Langendorff灌流，①分为Control和I30R60组，将心脏横切为5片，弃去心耳片后，由心耳往心尖方向依次记为第1片、第2片、第3片、第4片并进行TTC染色，分别于染色后4个时间点（1、2、3、4周）对4个横切片进行逐个观察，并通过统计前2片、前3片和前4片的方法计算梗死面积百分比;②分为Control、I30R60组、I40R60组、I50R60组，观察不同缺血组缺血前及再灌注期间心率(heart rate，HR)和冠脉流量（coronary flow，CF），测定灌流液中乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase，LDH)、肌酸激酶(creatine kinase，CK)漏出量和组织中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)、丙二醛(malondial-dehyde，MDA)含量，并以TTC法测定梗死面积;③分为Control、10-7M NP组、10-5 M NP组，观察2个浓度NP灌流心脏后HR、CF和灌流液中LDH漏出量的变化;④分为I50R60组、10-7 M NP缺血再灌注组、10-5 M NP缺血再灌注组，观察2个浓度NP作用后离体心脏在再灌注期间HR、CF、灌流液中LDH、CK漏出量和组织中SOD的变化;⑤分为I50R60组、10-7 M E2组、10-7 M NP+10-7 M E2组、10-5M NP+10-7M E2缺血再灌注组，观察2个浓度NP与10-7M E2联合使用后对离体心脏再灌注期间HR、CF、灌流液中LDH、CK漏出量和组织中SOD的影响。　　 结果：　　 1、与Control组相比，I30R60组心脏在1周内观察时第1至第4横切片梗死面积百分比均显著增加;2周内观察时，第2、3、4横切片可见明显梗死区域;3周内观察时，4个心脏横切片无统计学差异;4周内观察时，仅第4片具有统计学意义。在计算梗死面积百分比方法中，与Control组相比，I30R60组心脏无论采用前2片、前3片和前4片进行计算，在1周和2周内观察均具有统计学差异，而在3、4周内观察均无明显差异。　　 2、与Control组相比，I30R60组各指标尚未全部发生显著性变化;I40R60和I50R60组HR和CF降低，梗死面积增大，灌流液中LDH和CK漏出值升高，组织中SOD和MDA值降低;上述所观察指标中，I50R60组变化更为显著。　　 3、10-7 M NP直接灌注离体心脏能在灌流初期显著提高HR、而对CF和LDH无影响。而10-5M NP能显著降低HR和CF，并使LDH漏出量显著升高。　　 4、10-7M NP和10-5M NP处理I50R60模型结果显示，2个浓度的NP对再灌注期间HR无影响，CF基本不变，而10-5M NP的CF改变率也仅在再灌初期有所降低，2个浓度NP不影响I50R60模型的梗死面积百分比，10-5M NP均能够显著降低再灌注第5 min的LDH值，但随灌注时间的延长，LDH漏出量逐渐上升，而10-5MNP组降低再灌注第40 min和60 min的LDH值。随着NP浓度的升高，SOD值明显降低。　　 5、10-7M E2能够升高再灌期间的HR，对CF无明显影响，但能够减少梗死面积，降低再灌注期间的LDH和CK值，且能够降低心肌组织中的SOD值。2个浓度NP分别与E2联合使用作用于缺血再灌注模型后均能逆转E2对心脏再灌注HR的提高作用，且能使梗死面积增加。10-7M E2和10-5M NP联合组能明显升高再灌期间的LDH和CK值的漏出量，提示10-5M NP可能干扰10-7M E2对豚鼠离体心脏缺血再灌注损伤的保护作用。　　 结论：　　 1、用TTC染色法评价豚鼠离体心脏缺血再灌注损伤时，可以采用单片或多片心脏横切片评估梗死程度，并且需要在染色后2周内观察为宜。　　 2、豚鼠离体心脏缺血再灌注损伤受缺血时间的影响，豚鼠离体心脏缺血再灌注损伤模型的建立以缺血50 min为宜，再灌注时间可考虑限制于15 min至60 min之间。　　 3、在HR、CF和LDH三个指标观察下，确定10-5M NP对豚鼠离体心脏可能存在直接毒性作用。　　 4、在HR、CF、LDH、CK、梗死面积百分比和SOD6个指标观察下，未观察到10-7 NP和10-5M NP对豚鼠离体心脏有明显的加重缺血再灌注损伤的作用。　　 5、在HR、CF、LDH、CK、梗死面积百分比和SOD6个指标观察下，确认10-5 MNP能干扰E2对豚鼠离体心脏缺血再灌注损伤的心肌保护作用。