硫化氢（H2S）被广泛认为是哺乳动物内源性信号气体传递器。研究表明,多种病理生理状态下会出现H2S浓度异常。2021年Science杂志发文称,由于细菌在抗生素氧化应激刺激下会代偿产生H2S,破坏细菌H2S介导的防御系统可以抑制细菌耐受性并清除持留菌。因此,寻找抑制细菌H2S产生的化合物是遏制细菌耐药性产生的有益策略,该方法有望成为广谱抑菌方法;但是该策略需要被广泛实施及验证,并且需要发现大量选择性抑制细菌H2S产生的化合物并投入使用。胱硫醚γ-裂解酶（CSE）催化内源性H2S的生物合成,是在病理生理条件下调节H2S水平的潜在靶标。目前现有的CSE抑制剂多在高浓度下使用,对酶的选择性也不高,大多数hCSE抑制剂通过靶向辅酶磷酸吡哆醛（PLP）起作用,会干扰其他PLP酶的活性。因此,筛选新型、有效、特异性的CSE抑制剂具有重要的现实意义。本文主要研究以下三点内容:1、以虚拟筛选模型初步划定实验筛选范围,以新型荧光探针CSEP作为CSE底物构建荧光检测法,实时监测CSE的活性。结合酶动力学分析,设计优化了高通量筛选体系,经过初筛和复筛除去不抑制以及假阳性的化合物,得到CSE的六种阳性抑制化合物。2、对以上筛选的六种阳性化合物进行抑制效果的表征。经检测半抑制浓度IC50值、抑制类型及对 CSE 的选择性,得到 Tideglusib（IC50=4.455 μM）和 Ebselen（IC50=1.063μM）对CSE的抑制效果较好。鉴于Ebselen是具有多重功效的潜在活性药物,接下来对Ebselen及其它硒类化合物做了进一步的筛选及验证,得到二苯二硒（IC50=0.06743μM）对CSE的选择性较好相对于CBS,且二苯二硒竞争性的抑制CSE活性。3、基于荧光生物成像技术,验证筛选的二苯二硒（DiSe）和Tideglusib两个化合物对细胞中CSE和H2S的抑制效果。利用AzMC和CSEP两种荧光探针作对照实验,在共聚焦显微镜下通过观测细胞中平均荧光强度的变化,并反映活细胞中H2S及CSE水平。结果表明,DiSe和Tideglusib以剂量依赖的方式降低HCC-LM3细胞中内源性H2S水平及CSE水平。综上,本文将理论虚拟筛选和实验高通量筛选相结合,用于现实中胱硫醚γ-裂解酶（CSE）抑制剂的高效筛选,实现了筛选过程的简单化。以CSEP探针为基础,实验筛选出了适用于CSEP新型探针的高效CSE抑制剂,实现了调控-监测细胞中CSE浓度水平的高灵敏探测方法。该研究将为CSE和H2S抑制剂的筛选方法提供借鉴,且筛选得到的抑制剂结构将为CSE有效抑制剂的结构设计提供设计模板与思路。