【摘 要】
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目的:后发性白内障可导致患者的视功能障碍、生活质量下降,是目前白内障摘除术后最常见的并发症,其公认的机制是白内障摘除术后残留的晶状体上皮细胞（LECs）在多种因素介导下的异常增殖和迁移。氯离子通道几乎在所有细胞上均有表达,并参与调节细胞增殖、分化和凋亡等生物学功能。5-硝基-2（3-苯丙胺）-苯甲酸（NPPB）是非特异性氯离子通道阻滞剂,对电压门控氯离子通道、容量感受性氯离子通道、钙激活氯通道等多
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目的:后发性白内障可导致患者的视功能障碍、生活质量下降,是目前白内障摘除术后最常见的并发症,其公认的机制是白内障摘除术后残留的晶状体上皮细胞（LECs）在多种因素介导下的异常增殖和迁移。氯离子通道几乎在所有细胞上均有表达,并参与调节细胞增殖、分化和凋亡等生物学功能。5-硝基-2（3-苯丙胺）-苯甲酸（NPPB）是非特异性氯离子通道阻滞剂,对电压门控氯离子通道、容量感受性氯离子通道、钙激活氯通道等多种氯离子通道均有阻断作用。因此,本研究旨在探讨NPPB对LECs的增殖和迁移的影响及可能的机制,为预防及治疗PCO提供进一步的实验依据。方法:采用体外细胞培养的方法培养人晶状体上皮细胞（HLECs）,取处于对数生长期的HLECs分为四组,分别用浓度为0μmol/L、100μmol/L、200μmol/L、400μmol/L的NPPB干预12h、24h、48h后,分别采用XTT比色法检测HLECs的增殖活性、细胞划痕实验检测HLECs的迁移率、Western blot检测钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ（Ca MKⅡ）在HLECs内的表达量,并将各组数据进行统计学分析。结果:（1）不同浓度NPPB干预后HLECs的形态学改变:不同浓度NPPB实验组在相同时间点与0μmol/L空白对照组比较,HLECs数量明显减少,细胞间质显著增加。（2）XTT比色法检测细胞增殖活性:各实验组与0μmol/L空白对照组相同时间点比较,不同浓度NPPB实验组在12h时间点细胞数变化无统计学意义（P＞0.05）;100μmol/L浓度NPPB实验组在48h时HLECs细胞数较空白对照组减少并有统计学意义（P＜0.05）,200μmol/L组、400μmol/L组在24h时HLECs细胞数开始减少并有统计学意义（P＜0.05）,但200μmol/L组、400μmol/L组相同时间点比较均无统计学意义（P＞0.05）,同一浓度组内不同时间点比较,0μmol/L组及100μmol/L组HLECs细胞数增加均有统计学意义（P＜0.05）,200μmol/L组及400μmol/L组HLECs细胞数增加但无统计学意义（P＞0.05）。（3）细胞划痕实验检测细胞迁移率:相同时间点不同浓度比较,各浓度NPPB对HLECs迁移率的抑制作用均有统计学意义（P＜0.05）,且随NPPB浓度增大抑制作用越强;同一浓度不同时间点比较,0μmol/L组、100μmol/L组、200μmol/L组在三个时间点NPPB对HLECs迁移率的抑制作用均有统计学意义（P＜0.05）,但400μmol/L浓度NPPB对HLECs迁移率抑制作用无统计学意义（P＞0.05）。（4）Western blot检测Ca MKⅡ的蛋白表达量:各浓度实验组在相同时间点两两比较时,Ca MKⅡ表达的下降均有统计学意义（P＜0.05）。相同浓度不同时间点比较,100μmol/L组浓度NPPB干预后不同时间点时Ca MKⅡ表达下降有统计学意义（P＜0.05）;而200μmol/L组、400μmol/L组12h与24h比较Ca MKⅡ表达无统计学意义（P＞0.05）,24h与48h比较Ca MKⅡ表达下调并有统计学意义（P＜0.05）。结论:1.NPPB能够抑制HLECs的增殖和迁移,浓度越高抑制程度越大。2.NPPB能够下调HLECs内Ca MKⅡ的表达,浓度越高下调作用越强。3.NPPB抑制HLECs的增殖和迁移的机制可能是通过下调Ca MKⅡ的表达实现。
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