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研究背景:创面、糖尿病足及其他细菌感染等多种因素造成的皮肤组织缺损的修复,对于整形外科及其他外科等,一直是个难以解决的问题。脂肪干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)是一种多能间充质干细胞,它具有分化为脂肪细胞、成骨细胞及软骨细胞的能力。近期越来越多的研究表明,自体或同种异体来源ADSCs具有对适应性和先天性免疫发挥调节作用的独特能力。近年来大量的研究发现,ADSCs能够通过迁移至炎症部位或分泌细胞因子等机制对免疫细胞进行远距离调控,进而来调节炎症反应。外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cell,PBMC)包括淋巴细胞、单核细胞、巨噬细胞及树突状细胞等,在免疫炎症等反应中一直担负着重要的作用。植物血凝素(Phytohemagglutinin,PHA)是一种蛋白质与低聚糖的复合物,作为一种刺激因子,它能够激活PBMC中的淋巴细胞继而使其分裂增殖,释放出淋巴因子,并且能够提高巨噬细胞的吞噬作用,将PBMC模拟成炎症反应时细胞所处的微环境状态。本实验拟探究炎症微环境中,ADSCs对PBMC分泌炎症因子能力的调控作用。实验目的:提取及鉴定ADSCs和PBMC,用PHA刺激PBMC以模拟出炎症反应微环境,将炎症因子预处理后的ADSCs与PBMC共培养,探究ADSCs对PBMC分泌炎症因子能力的影响,进而探究ADSCs对炎症微环境的作用。实验方法:1、ADSCs及PBMC的提取、培养及鉴定;2、用PHA激活PBMC并检查激活后结果;3、分别用干扰素-γ(Interferon,IFN-γ)和肿瘤坏死因子-α(Tumor Necrosis Factor,TNF-α)对脂肪干细胞进行24h的预刺激,激活其免疫调节能力,并将PHA激活的PBMC与预刺激后的ADSCs共培养,共培养24h后检测培养上清IFN-γ和TNF-α的水平。4、使用SPSS 19.0和Graph pyramid 5软件分析数据,P<0.05被认为具有统计学意义。实验结果:1、成功提取人ADSCs及PBMC;2、PHA能够有效激活PBMC并促进PBMC分泌更多的促炎性细胞因子IFN-γ和TNF-α;3、IFN-γ以及TNF-α预处理的ADSCs能够有效抑制PHA激活的PBMC分泌IFN-γ及TNF-α。实验结论:1、证实PHA可以刺激PBMC分泌更多的IFN-γ和TNF-α;2、炎症因子预刺激的ADSCs能够使PHA刺激后的PBMC分泌IFN-γ和TNF-α的能力受到明显抑制;3、证实ADSCs对炎症反应具有抑制作用。