目的:中性粒细胞（PMN）活化是启动和加剧心肌缺血再灌注损伤（MIRI）的重要机制。我们前期研究发现阻断/基因敲除TRPV4后可明显减少小鼠MIRI后心脏组织中PMN的浸润,并减轻心肌损伤。多项研究表明TRPV4参与多种疾病的炎症反应过程,但TRPV4是否通过调节PMN活化参与MIRI仍不清楚。在本研究中,我们探讨了TRPV4是否参与调节PMN的活化并初步研究了PMN上TRPV4参与小鼠MIRI的机制。方法:分离小鼠骨髓PMN,采用Western blot和免疫荧光的方法检测PMN上TRPV4的表达和分布,膜片钳记录PMN上TRPV4电流,并利用钙荧光染料Fluo-4/AM检测细胞内Ca2+浓度([Ca2+]i)改变。利用Transwell检测PMN的趋化能力,利用活性氧（ROS）染料Luminol和DCFH-DA检测ROS的生成,利用Sytox Green染料检测中性粒细胞外诱捕网（NETs）的释放,髓过氧化物酶（MPO）试剂盒检测MPO的活力。我们利用HL-1细胞缺氧/复氧（H/R）模拟在体MIRI过程,用乳酸脱氢酶（LDH）试剂盒检测心肌细胞的损伤水平。结果:小鼠PMN上有TRPV4的蛋白表达,TRPV4主要表达于PMN细胞膜表面。PMN细胞膜上可记录到GSK790A诱导的TRPV4电流,且细胞钙荧光显示GSK790A可浓度依赖性的诱导PMN[Ca2+]i增加。同时,这些效应可被TRPV4阻断剂或TRPV4基因敲除所减轻或消除。我们发现TRPV4阻断剂或TRPV4基因敲除可以减少PMN向fMLP的趋化反应。与常见的PMN活化剂fMLP和PMA类似,TRPV4激动剂GSK790A可以增加PMN的ROS水平、促进NETs的释放以及MPO的分泌等,且这些效应可被TRPV4阻断剂或TRPV4基因敲除所抑制。有意思的是,我们发现阻断TRPV4可减少fMLP介导的Ca2+内流,而PMA却不引起PMN[Ca2+]i改变。此外,我们发现阻断TRPV4可减少PMN向H/R上清的趋化。活化TRPV4后的PMN上清可使心肌细胞释放的LDH进一步增加。结论:小鼠PMN上存在TRPV4的功能性表达,且TRPV4参与调节PMN的趋化、ROS和NETs生成、MPO的释放等多个活化过程。有意思的是,阻断TRPV4可减少H/R过程中PMN向损伤心肌的趋化,激活TRPV4后则可进一步加重PMN对心肌细胞的损伤效应。因此,PMN上的TRPV4参与MIRI的发病过程,有望成为MIRI新的有效治疗靶点。