【摘 要】
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1研究目的骨质疏松是我国三大老年病之一,骨质疏松及其引起的骨折发病率依然会不断高,成为影响生活质量的一个重要因素。同时,发展中医药和老年事业,是目前我国经济社会领域的两大重要战略。酪蛋白激酶2相互作用蛋白1（Casein kinase 2 interacting protein-1,CKIP-1）是已报道的骨形成抑制分子,在老龄性和废用型骨质疏松中表达上调。CKIP-1能够增强泛素连接酶Smurf
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1研究目的骨质疏松是我国三大老年病之一,骨质疏松及其引起的骨折发病率依然会不断高,成为影响生活质量的一个重要因素。同时,发展中医药和老年事业,是目前我国经济社会领域的两大重要战略。酪蛋白激酶2相互作用蛋白1（Casein kinase 2 interacting protein-1,CKIP-1）是已报道的骨形成抑制分子,在老龄性和废用型骨质疏松中表达上调。CKIP-1能够增强泛素连接酶Smurf1与其底物Smad1/5的亲和力,促进其降解,进而抑制BMP信号通路,抑制骨形成。本实验旨在研究功能性食品原料对CKIP-1这一新靶标基因表达及相关标志物骨钙素分泌的影响,推测可能有效果的功能性成分,为精准改善增龄性或废用型骨质疏松的小分子药物筛选供理论依据。2研究方法本实验以小鼠成骨细胞MC3T3-E1为研究模型,制备功能性食品原料醇物（Alcohol extracts of functional food materials,AEFFM）,用CCK8检测细胞的活性,来确定各种醇物合适的加药浓度范围。将上述无显著细胞毒性浓度范围内的AEFFM加入MC3T3E1细胞中培养至72小时,用Western blot检测细胞中CKIP-1蛋白表达水平。ELISA法检测细胞中骨钙素的浓度,以验证待测醇物对CKIP-1蛋白表达和骨钙素分泌同时有作用效果。选取能够抑制CKIP-1基因表达同时增加骨钙素分泌的功能性食品原料。使用UPLC-MS/MS分析有作用效果的功能性食品原料当中的类黄酮成分。3研究结果CCK8结果显示:补骨脂、刺五加在0.1～10μg/m L的剂量范围内没有明显的细胞毒性,对MC3T3-E1细胞的增殖活性没有影响;女贞子、淫羊藿在0.1～50μg/m L的剂量范围内没有明显的细胞毒性,对MC3T3-E1细胞的增殖活性没有影响。石斛、五味子、山茱萸、覆盆子、红景天、桑葚子、骨碎补、黄芪等八种在0.1～100μg/m L的剂量范围内没有明显的细胞毒性,对MC3T3-E1细胞的增殖活性没有影响。Western blot结果显示:经加药浓度范围内试验,五味子、女贞子、覆盆子、红景天等四种AEFFM对CKIP-1蛋白表达有明显抑制作用,其中五味子、女贞子、红景天的抑制梯度关系显著。ELISA结果显示:女贞子、淫羊藿在0.1～50μg/m L的剂量范围内促进小鼠骨钙素分泌;五味子、红景天在0.1～100μg/m L的剂量范围内对小鼠骨钙素分泌有促进作用。UPLC-MS/MS结果显示:五味子、女贞子、红景天等三种功能性食品原料经处理分离出类黄酮成分。根据数据库比对,发现均含有没食子酸等十二种共有化合物,各自含特有化合物五味子5种,女贞子7种,红景天3种。4研究结论综上所述,五味子、女贞子、红景天等三种醇物对CKIP-1所介导的骨质疏松可能有作用。为精准改善骨质疏松、新药筛选供数据支持和理论依据。
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