生防真菌盾壳霉抗杀菌剂菌核净的诱变及其抗性机制分析

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核盘菌[Sclerotinia sclerotiorum(Lib.)de Bary]引起的油菜菌核病是油菜生产上的一种重要病害,在我国长江流域为害尤其严重。菌核病的生物防治研究一直是国内外学者的研究热点,盾壳霉(Coniothyrium minitans)是核盘菌的一种重要的重寄生菌,具有防治油菜菌核病的潜能。本文从适应性变异的盾壳霉后代中获得了4个抗杀菌剂菌核净的突变菌株;研究了这些突变菌株抗药性的遗传稳定性和一些生物学特性以及渗透压敏感性;研究了突变菌株产生抗药性的机制。本研究采用适应性诱变的方法获得了4个抗杀菌剂菌核净的盾壳霉突变体:SD-100、SD-200、SD-350和SD-400。它们分别能在含100μg/ml、200μg/ml、350μg/ml和400μg/ml菌核净的马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)上生长。将这些抗性菌株在不含菌核净的PDA培养基上连续转10代,再分析后代的抗药特性。结果显示:4个盾壳霉突变菌株对菌核净的抗性具有遗传稳定性。在生物学特性方面,突变菌株在菌丝生长和孢子萌发方面略低于亲本菌株;突变菌株在淀粉酶、蛋白酶以及葡聚糖酶活性等指标方面也发生了不同程度的变化。另外,本研究对盾壳霉野生型菌株和突变菌株的渗透压敏感性进行了测定。采用的缓冲剂包括葡萄糖,蔗糖,氯化钠,氯化钾,硫酸镁,山梨醇,甘露醇和甘油。结果显示:野生型菌株和突变菌株对渗透压的敏感性存在显著差异。获得了盾壳霉双组份组氨酸激酶6个氨基酸重复序列基因的全部序列。将其与野生型进行比对,发现:480位点的氨基酸发生了突变,由T(苏氨酸变成了N(天冬酰胺)。
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