MinE基因功能初步研究及木薯淀粉含量测定方法探究

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MinE蛋白在质体分裂中起着关键作用。本研究从木薯(Manihot esculenta Crantz)基因组中分离出MinE基因(MeMinE),并对其进行相关生物信息学分析及木薯不同部位特异性表达分析。高浓度及高活力的木薯叶肉原生质体被分离纯化出来,并成功地在木薯叶肉原生质体中进行GFP融合的MeMinE蛋白的瞬时表达。结果显示MeMinE蛋白定位于叶绿体上,且木薯叶肉原生质体中MeMinE蛋白的过量表达可导致木薯叶肉原生质体中叶绿体的数量和大小显著减小。在大肠杆菌中MeMinE蛋白的过量表达也会造成大肠杆菌的不正常分裂,造成细胞两级异常分裂进而导致小细胞的出现。通过转基因技术,将重组工程菌pCAMBIA1300 eGFP-MeMinE转化木薯华南8号(SC8)体细胞子叶胚,获得MeMinE过表达的幼苗。本研究比较了木薯和马铃薯淀粉颗粒的形状,直径和分子量大小的差异。结果显示木薯淀粉颗粒通常呈现多面体并且一端被截断的形状,而马铃薯淀粉颗粒呈现规则的椭圆形。木薯淀粉颗粒的直径大多处在0-20μm之间,而马铃薯淀粉颗粒的直径大多处在740μm之间。木薯淀粉颗粒的平均直径比马铃薯淀粉颗粒的平均直径小20μm。木薯和马铃薯淀粉的直链淀粉及支链淀粉的分子量大小也有很大差异。所有这些差异将直接或间接导致木薯和马铃薯淀粉与碘结合的能力的差异,最终导致用于双波长碘结合法中测量淀粉含量的标准曲线出现不同。当用双波长碘结合法(以马铃薯淀粉为标准品)测定木薯样品的淀粉含量时,测得的直链淀粉含量比相应的理论值偏高5.31%-29.59%,支链淀粉含量比相应的理论值低15%-209.9%,最终测得的总淀粉含量比相应的理论值低8.29%-115.85%。我们最终认定,当用双波长法测量木薯样本淀粉含量时只能用木薯淀粉做为标准品生成标准曲线。
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