目的:TFⅡB相关因子2(BRF2)是构成TFⅢB复合体的关键组成部分,BRF2-TFⅢB复合体也是使Pol Ⅲ精确募集到靶基因处并形成转录活性起始复合物全过程所需的关键因子。近年来,在多种癌症细胞中发现BRF2蛋白表达异常并对癌症发生发展发挥一定作用,而在胃癌中的研究并未见有报道。本研究旨在研究BRF2在胃癌以及胃癌前疾病中的表达和功能的研究。方法:1、通过免疫组织化学实验在806例胃癌患者的癌和癌旁组织中检测BRF2的表达,并利用15例胃癌患者的癌和癌旁新鲜组织的WB、PCR实验以及数据库分析验证BRF2在胃癌和癌旁正常组织中的表达。2、根据详尽的临床资料,分析BRF2表达高低与患者病理资料的相关性,包括:性别、年龄、肿瘤大小、分化程度、肿瘤的侵袭(pT)、淋巴结转移(pN)、生长方式等,并做Kaplan-Meier生存曲线分析BRF2的表达与患者生存的相关性。再进一步将患者按各种病理资料的不同分成不同亚组人群,在这些亚组人群中分析BRF2的表达高低和患者的生存情况有无相关性。3、提取5种细胞系的总RNA做PCR实验,其中4种胃癌细胞系:AGS、MGC803、HGC27、SGC7901和1种胃粘膜细胞系GES-1。研究BRF2在胃癌细胞系中表达情况,并选择在BRF2基因表达较高的两种细胞系:AGS和SGC7901中,用Si-RNA敲除BRF2基因,做进一步细胞功能的研究,包括:检测细胞增殖能力的CCK-8实验、细胞迁移能力的划痕实验、细胞侵袭能力的Transwell实验,以及流式细胞周期试验。4、为了研究BRF2是否与肿瘤发生阶段具有相关性,选取了于2017年在中国医科大学附属一院接受胃镜下取病理且诊断为胃癌前疾病的病例的组织蜡块,包括诊断为:胃粘膜高级别异型增生、萎缩性胃炎伴肠化生、胃溃疡、胃息肉的患者的组织蜡块,各20例。并同时取胃镜下诊断为胃癌和正常组织即浅表性胃炎的病例的组织蜡块作对照组,再次做免疫组化实验。5、统计分析:全文统计均使用SPSS 22.0计算完成。免疫组化实验的评分结果用Mean±SD表示,使用t-test检验分析。用非参检验分析表达高低与临床病理资料的相关性;生存分析采用Kaplan-Meier方法计算。以P<0.05判定是否有显著性差异。结果:1、BRF2在胃癌(6.124±2.096)中的表达明显高于邻近的正常组织(4.275±1.886)(P<0.001)。为了进一步研究BRF2在组织中表达情况,将15对新鲜组织提取RNA,做PCR,结果显示△Ct癌组织为9.818±1.158,而△Ct癌旁组织为11.08±1.319(P<0.01)。同时,WB显示这些病例中BRF2蛋白在胃癌组织内(T=1.214±0.4605)的表达也高于癌旁正常组织(N=0.6709±0.2261)(P<0.01)。这与Oncomine数据库分析获得的趋势一致。2、统计分析结果显示:BRF2的表达与患者的性别、年龄、肿瘤大小、分化程度、肿瘤的侵袭(pT)、淋巴结转移(pN)、生长方式等均无相关性。Kaplan-Meier生存曲线分析表明BRF2的表达高低和患者的生存情况也无显著相关性(P=0.245)。将患者按各种病理资料分成不同亚组人群,在这些亚组人群中也没有发现BRF2的表达的高低和生存的相关性。因此,推测BRF2可能与肿瘤的发展无相关性,而应该与癌症的发生阶段有变化。3、相比于正常胃粘膜细胞系GES-1,BRF2在多种胃癌的细胞系中出现显著的高表达(P<0.01)。依据PCR结果,在BRF2基因表达较高的两种胃癌细胞系:AGS和SGC7901中,用Si-RNA敲除BRF2基因,做进一步细胞功能的研究。但很遗憾的是增殖实验、划痕实验、和Transwell实验以及流式细胞周期试验均没有发现Si-RNA组与对照组NC组有显著的差异。这进一步提示:在胃癌中BRF2虽然表达上调,但它可能在胃癌的发展阶段并不起显著作用。4、BRF2在多种癌前疾病以及胃癌组织(6.35±2.159)中的细胞核内表达明显高于浅表性胃炎(4.35±1.899),这些癌前疾病包括:胃粘膜高级别异型增生(6.2±1.881)(P<0.01)、萎缩性胃炎伴肠化生(5.9±1.553)(P<0.01)、胃息肉组织(6.05±2.038)(P<0.01)。而在胃溃疡(4.6±1.93)中表达水平与浅表性胃炎差异不明显(P=0.682)。结果表明:在胃癌的多种癌前病变组织中BRF2的表达已有明确的上调,尤其在胃粘膜高级别异型增生组织、萎缩性胃炎组织和胃息肉组织中。因此这结果提示,BRF2在胃癌的发生阶段已出现异常表达,这对研究胃癌发生的机制提供一个新的思路。结论:1、在胃癌组织中,BRF2的表达水平显著高于癌旁组织。2、BRF2在胃癌患者癌组织内表达的水平与患者的临床病理资料以及预后均无显著相关性。3、相比于正常胃粘膜细胞系GES-1,BRF2在多种胃癌的细胞系中,如AGS、SGC-7901等均出现显著的高表达,但对胃癌进展阶段的多种细胞功能均未见显著作用。4、相对于胃正常粘膜组织,BRF2在多种胃癌癌前疾病组织中出现显著高表达,包括:胃粘膜高级别异型增生组织、萎缩性胃炎伴肠化生组织和胃息肉组织。这证实了BRF2在胃癌发生阶段已经出现表达上调,它表达的上调是胃癌发生的早期事件。这些结果提示BRF2可能对胃癌的发生发挥潜在的作用。BRF2能成为潜在的用于胃癌早期诊断的生物学的标志物和早期治疗的作用靶点。