长链非编码RNA对心肌梗死后血管新生作用的研究

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心肌梗死(Myocardial Infarction,MI)是指心肌出现严重而持久地急性缺血导致的心肌缺血性坏死,MI以高致病率和死亡率威胁着人类健康。MI后可以通过血管新生得到改善,血管新生是一种十分复杂的生物过程,需要多种因子共同参与。长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)是一类长度超过200 nt的非编码RNA,几乎不参与蛋白质的编码,但其可在各种疾病过程中发挥重要的调控作用。近年来有很多文献报道lncRNA在癌症等疾病中通过调节人脐静脉内皮细胞(HUVECs)从而影响血管新生,而MI后的血管新生却鲜有报道。本研究通过构建小型猪心梗模型,经过RNA高通量测序从而筛选得到与心梗相关的lncRNA,运用基因克隆、q RT-PCR、载体构建、细胞培养、细胞转染等生物技术将候选lncRNA转进HUVECs内进行表达,通过Ed U检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,基质胶实验检测细胞体外成管等实验来摸索lncRNA在心梗后对血管新生的影响。本研究主要结果如下:1、成功扩增出5个候选lncRNA全长,分别为1555 nt,819 nt,1358 nt,1018 nt,2085 nt;经q RT-PCR验证,5个lncRNA的表达量与测序结果一致。2、由相关生物信息学筛选得到5个候选lncRNA的靶基因,分别为ANGPT2,BCL2,ATG7,VEGFC和p53;结果表明BCL2、ATG7和p53可能是lncRNA2、lncRNA3和lncRNA5的靶基因,ANGPT2、VEGFC与lncRNA2、lncRNA4无靶标关系。3、lncRNA1、lncRNA2和lncRNA4能够抑制内皮细胞增殖,lncRNA3和lncRNA5可以促进内皮细胞增殖。4、lncRNA1、lncRNA2和lncRNA4能促进内皮细胞凋亡,lncRNA3、lncRNA5能抑制内皮细胞凋亡。5、lncRNA1、lncRNA4和lncRNA5能抑制内皮细胞小管形成,lncRNA2和lncRNA3能促进内皮细胞小管形成。本研究结论如下:lncRNA1和lncRNA4通过抑制内皮细胞增殖从而抑制其体外小管形成,lncRNA3通过促进内皮细胞增殖从而促进其体外小管形成。
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