克氏原螯虾(Procambarus clarkii)在我国稻渔综合种养战略中处于重要地位。克氏原螯虾的特性决定了采用益生菌和中药内服保健及预防细菌病比传统抗菌剂治疗细菌病更符合产业发展和食品安全要求。本研究包含两项内容:1.市售芽孢杆菌益生特性和安全性的评价为了解市售稻虾用芽孢杆菌类益生菌现状,从市售产品中分离到19株芽孢杆菌,通过抑菌、溶纤维素、低温-缺氧生长速度、芽孢对高温、低p H、高胆汁酸盐耐受、细菌自聚集及疏水性、溶血活性、K-B法药敏试验等离体试验评价这些菌株作为益生菌的潜能;进一步,通过小鼠攻毒试验、克氏原螯虾养殖试验等在体试验进一步评价候选株的益生效应和安全性。主要结果如下:分离的19株芽孢杆菌中有10株为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、5株为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)。有14株芽孢杆菌对测试的8株病原菌(金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)、凡隆气单胞菌(Aeromonas veronii)和杀鲑气单胞菌(Aeromonas salmonicida)各1株,大肠杆菌(Escherichiacoli)4株)中的1到6株有不同程度的抑制,且抑菌指数在1.30与5.09之间。有14株芽孢杆菌可以溶解纤维素,且溶纤维素指数在1.22与1.54之间。分离株的生长速度随温度(37℃、25℃、15℃)降低而下降;不同温度下,生长速度最快的菌株不同,其分别是B18(37℃)、B26(25℃)、B14(15℃)。分离株生长速度随环境含氧量降低而下降。分离株的自聚集性较强,均在70%以上,但疏水性较弱,最高才27.78%。大部分分离株的芽孢对高温、低p H、高胆汁酸盐有较强耐受。有8株分离菌(含B22和B40)对部分抗生素有耐药性。有8株芽孢杆菌(含B14和B40)对兔红细胞有β-溶血活性。满足抑菌、溶纤维素、15℃和缺氧生长这四项指标的菌株只有B14、B22、B40。为弄清有溶血活性的解淀粉芽孢杆菌B14和B40株能否用于内服,选取B14和B40株作为后续体内试验的菌株。B14和B40株对小鼠(20±2 g,5周龄)的腹腔注射急性攻毒试验(109-1011 cfu/只)和慢性攻毒试验(108 cfu/只)中,均未见死亡和病理变化。克氏原螯虾(初始体长2-4 cm)20 d饲养试验显示,B14和B40有促进生长效应;但随着饲养时间的增加,促生长效应逐渐消失。B14、B40有降低饲料转化率的趋势。B14、B40投喂20 d引起试验虾肠炎。肠道菌群分析显示,B14、B40处理降低了肠道菌群的多样性,且气单胞菌属丰度显著高于对照组;进一步的检测发现,B14、B40处理组的气单胞菌属特异性毒力基因的种类和丰度要高于对照组。综上,解淀粉芽孢杆菌B14和B40对克氏原螯虾生长的益生效应并不明显,而且能引起试验虾肠炎。其肠炎发生机制可能涉及肠道菌群多样性下降、气单胞菌属丰度上升、气单胞菌特异性毒力基因种类和丰度增加。因此,对市场上芽孢杆菌属益生菌的有效性和安全性有必要加强管理。2.复方中药对克氏原螯虾生长和抗应激的影响为弄清复方中药对低温(18-22℃)期克氏原螯虾(初始体长2-4 cm)生长和抗应激的影响,通过生长指标、抗氧化指标和肝胰腺转录组分析进行了评价。主要结果如下:水温18-22℃下,中药投喂20 d,有提高克氏原螯虾的增重率、特定生长率和饲料转化率的趋势,并提高了虾对应激诱导肠炎的抗性。中药组的谷胱甘肽过氧化物酶、过氧化氢酶、超氧化物歧化酶活性的平均值均高于对照组,且过氧化氢酶活性显著高于对照组(p<0.05)。中药组与对照组相比,肝胰腺差异表达基因共有122个,大部分与代谢及非特异性免疫功能相关。KEGG通路富集的类固醇生物合成、醚脂代谢、内噬、吞噬体和溶酶体通路上调,甘油磷脂代谢通路下调。荧光定量PCR验证的6个基因转录调节与转录组分析结果吻合。综上,本研究中的复方中药可能通过肝胰腺的非特异性免疫相关基因表达上调、增强抗氧化酶活性、提高脂类代谢和减少蛋白质分解,从而达到促生长和抗应激的效应。