【摘 要】
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灰树花（Grifolafrondosa）是一种广泛食用的药用真菌,具有良好的生物学活性。现已从灰树花的子实体和液体培养的菌丝体中分离出多种有效的抗肿瘤多糖。在本研究中,我们利用冷水从灰树花中提取了一种新的水溶性多糖,命名为cGFP,并研究了其对人肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响。利用低温（4℃）水提醇沉法提取灰树花粗多糖,采用Sevage法除去粗糖中的蛋白,利用超滤除去小分子物质,用Sephad
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灰树花（Grifolafrondosa）是一种广泛食用的药用真菌,具有良好的生物学活性。现已从灰树花的子实体和液体培养的菌丝体中分离出多种有效的抗肿瘤多糖。在本研究中,我们利用冷水从灰树花中提取了一种新的水溶性多糖,命名为cGFP,并研究了其对人肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响。利用低温（4℃）水提醇沉法提取灰树花粗多糖,采用Sevage法除去粗糖中的蛋白,利用超滤除去小分子物质,用Sephadex G-150凝胶柱洗脱得到大分子多糖组分cGFP,其得率为1.16%。高效液相色谱（HPLC）分析结果表明cGFP分子量为1231.7kDa。通过离子色谱、核磁共振和红外光谱检测发现cGFP主要是由甘露糖、半乳糖和葡萄糖三种单糖以摩尔比为1:1.48:2.05组成的α-吡喃型多糖,糖含量高达90.4±6.1%（w/w）。MTT实验表明,200μg/mL cGFP作用24 h能显著抑制人肝癌HepG2细胞的增殖,一定浓度范围内以剂量依赖方式诱导HepG2细胞凋亡;通过PI染色检测细胞周期发现cGFP导致S期细胞大量聚集;Annexin V-FITC与PI双染试验发现,cGFP诱导HepG2细胞逐渐由早期凋亡走向晚期凋亡。经过扫描电镜观察发现cGFP处理的HepG2细胞出现了典型的细胞凋亡形态。通过JC-1染色和Hoechst3342染色检测线粒体膜电势的变化发现cGFP会引起线粒体膜电位降低;通过qRT-PCR分析显示Bax蛋白表达增加并且Bcl-2蛋白表达减少。接下来Western blot实验结果表明:Bax蛋白量增加,Bcl-2蛋白量降低,细胞质基质中的细胞色素C（Cyto-c）的蛋白量升高,caspase家族蛋白被激活,caspase-3和caspase-9蛋白量均增加,进一步证明了 cGFP诱导的细胞凋亡通过线粒体途径起作用。这些结果表明,cGFP主要通过内源激活线粒体途径抑制细胞的增殖并诱导HepG2细胞凋亡。
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