野生茄子黄萎病抗性相关基因的克隆与表达研究

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黄萎病是一种危害性很大的植物维管束病害,严重影响着番茄、茄子、棉花、马铃薯等重要农作物的产量和品质。从野生茄中克隆黄萎病抗性相关基因对茄子黄萎病抗病育种具有重要意义。 以野生茄Solanum torvum幼嫩带芽茎段为外植体,在添加了6-BA的MS培养基上诱导组培苗的再生。在培养的早期,高浓度6-BA有利于芽的诱导,但会抑制芽的进一步发育,将芽转移至较低浓度的相同培养基上,芽继续伸长,并形成完整植株。 根据番茄Ve1、刚果茄SaVe1的cDNA全长序列比对结果设计引物,通过RT-PCR及3’-RACE扩增得到了Solanum torvum抗黄萎病基因的cDNA克隆片段(命名StoVe1),全长3400bp,编码一条长1051个氨基酸残基的多肽,理论分子量为117kD,等电点为5.74。蛋白结构预测发现:在其N端存在一个疏水的信号肽,蛋白主体部分存在23个完整或不完整的LRR序列,在LRR序列内部存在28个潜在的N-糖基化位点,在N端信号肽内部含有一个亮氨酸拉链;在C末端存在一个明显的跨膜结构域和一个由受体蛋白介导的内吞作用信号。氨基酸序列比对表明,StoVe1与番茄、刚果茄、类番茄抗黄萎病Ve蛋白相似性较高,与来自水稻、番茄及其它植物一些已知抗病蛋白及推断性抗病蛋白相似性较低。 系统发育分析表明,StoVe1和Ve1基因的同源性较之与Ve2基因的同源性低,说明Ve1基因在Solanum torvum与番茄间存在较大变异。半定量RT-PCR结果表明,StoVe1的表达量在根中最高,茎中次之,叶中最少。黄萎病是根系侵染的维管束病害,这可能是造成StoVe1在根中表达量最高的原因。 根据十个科中代表性植物的PGIP核酸序列多重比对结果设计引物,通过RT-PCR分离到Solanum torvum多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白基因的一个保守片段,长569bp。核酸序列比对结果表明,该片段与马铃薯和番茄PGIP基因的相应区段一致性分别达到88%和86%。该片段编码190个氨基酸残基。蛋白结构预测表明,肽段内部含有3个LRR序列,4个潜在的N-糖基化位点及8个磷酸化位点。氨基酸序列比对表明,该片段与来自蔷薇科、伞形花科、弥猴桃科、桃金娘科、锦葵科和芸香科的PGIP蛋白有较高相似性,与豆科的PGIP蛋白相似性最低。半定量RT-PCR结果表明,PGIP的表达量在茎中最高,根中次之,叶中最少,表明该基因在未受病原菌刺激条件下具有一定的基础表达,可能对病原菌的侵染起着实时监控的作用。
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